Salah satu cara klasik untuk menentukan konsentrasi mikroba dalam sampel adalah dengan mengencerkan sampel, menumbuhkan mikroba di piring dan menghitung koloni. Mikroba berlapis tumbuh dari unit pembentuk koloni yang terdiri dari satu atau lebih sel menjadi koloni yang terlihat yang dapat dilihat dan dihitung. Bakteri adalah mikroba yang paling umum untuk dinilai menggunakan jumlah piring. Penghitungan koloni digunakan untuk mendeteksi dan menghitung mikroba di tanah, air, dan makanan. Protokol untuk menghitung koloni menekankan pendekatan yang akurat dan metodis.
Sampel Pengenceran, Pelapisan dan Inkubasi
Jika Anda hanya mengoleskan sampel mikroba pada piring agar-agar, Anda akan melihat begitu banyak unit pembentuk koloni sehingga masing-masing koloni akan menyatu, sehingga tidak mungkin dihitung. Untuk mengatasi masalah ini, campurkan sampel ke dalam media cair, ambil sedikit campuran itu dan encerkan lebih lanjut. Ulangi proses ini enam sampai 10 kali. Sebarkan pengenceran akhir pada piring agar dan inkubasi selama empat sampai tujuh hari sebelum Anda menghitung koloni.
Penghitungan Manual
Trik utama dalam menghitung koloni adalah menghitung setiap titik koloni satu kali. Salah satu pendekatan adalah dengan mengatur cawan Petri pada latar belakang grid dan menghitung koloni di setiap sel grid, bergerak dalam pola metodis melalui semua sel. Menandai koloni yang dihitung di bagian belakang cawan Petri juga bisa menjadi pendekatan yang membantu. Umumnya, Anda perlu menghitung setidaknya tiga piring; hanya menggunakan pelat yang berisi 30 hingga 300 koloni untuk membuat kesimpulan yang kuat, saran Jaringan Mikrobiologi, sebuah perusahaan yang menyediakan layanan konsultasi untuk laboratorium dan produsen. Pelat dengan koloni yang terlalu banyak untuk dihitung atau dengan koloni yang terlalu sedikit perlu dilapisi ulang dari pengenceran baru.
Penghitungan Otomatis
Kesalahan manusia menambah waktu yang terlibat dalam menghitung koloni secara manual. Untuk meningkatkan akurasi dan efisiensi, letakkan cawan Petri di perangkat penghitung koloni otomatis. Penghitung koloni otomatis mengambil gambar piringan, memisahkan koloni dari latar belakang, lalu menggunakan algoritme untuk menghitung koloni di piring. Algoritme dapat mengalami kesulitan membedakan koloni ketika dua atau lebih koloni bersentuhan di tepinya, jadi ini adalah area pengembangan perangkat lunak yang sedang berlangsung.
Membuat Menghitung Lebih Rumit
Keakuratan penghitungan kepadatan mikroba dari jumlah koloni memang memiliki beberapa keterbatasan. Unit pembentuk koloni dapat berupa sel tunggal, rantai sel, atau kumpulan sel utuh. Asumsinya adalah bahwa satu koloni mewakili satu sel, sehingga konsentrasi yang dihitung dari jumlah koloni bisa rendah. Mikroba yang berbeda membutuhkan kondisi pertumbuhan yang berbeda, dan koloni pada cawan hanya mewakili mikroba yang tumbuh subur pada media pertumbuhan tersebut pada kondisi inkubasi tersebut. Selain itu, penghitungan koloni tidak mencatat sel mati, pertimbangan penting saat Anda membutuhkan konsentrasi sel dalam sampel asli.