Pengaruh pH pada Katekol Oksidase

Enzim memiliki struktur tiga dimensi yang ditentukan. Setiap perubahan dalam struktur ini menyebabkan perubahan aktivitas enzim. PH campuran reaksi memodifikasi struktur ini dan oleh karena itu, aktivitasnya. Setiap enzim memiliki pH optimum dimana menunjukkan aktivitas yang maksimal. Perbedaan yang signifikan dari pH ini menyebabkan perubahan struktur tiga dimensi enzim yang mengurangi aktivitasnya. Enzim katekol oksidase memiliki pH optimum sekitar 7.

Katekol dioksidasi oleh katekol oksidase dengan adanya oksigen untuk membentuk benzokuinon, yang jika terpapar udara, membentuk melanin. Enzim ini juga dikenal dengan nama lain, seperti tirosinase, difenol oksidase dan polifenol oksidase. Kentang, apel dan pisang mengandung katekol oksidase yang bekerja pada katekol tidak berwarna dan mengubahnya menjadi melanin berwarna coklat. Pencoklatan yang terjadi saat Anda memotong dan memaparkan barang-barang ini ke udara adalah hasil dari reaksi ini.

Katekol oksidase dapat diekstraksi dari pisang atau kentang. Hancurkan pisang dengan dua kali volume air dalam lesung dan alu. Sebagai alternatif, campurkan pisang dengan air untuk mendapatkan ekstrak katekol oksidase. Saring melalui mentega muslin dan simpan di lemari es. Jika Anda menggunakan kentang, kupas dan potong-potong, lalu haluskan dengan kecepatan tinggi menggunakan 700 ml air suling dingin. Saring jus kentang ini melalui kain tipis dan dinginkan.

Siapkan larutan buffer dengan nilai pH 2, 4, 6, 7 dan 8. Beri label pada lima tabung reaksi dengan nilai pH ini. Isi setiap tabung hingga seperempat kapasitas dengan buffer masing-masing. Tambahkan 10 tetes ekstrak katekol oksidase ke dalam masing-masing tabung tersebut, diikuti dengan 10 tetes katekol. Kocok tabung dan catat warna masing-masing tabung pada skala 0 sampai 5 di mana 0 menunjukkan tidak ada warna dan 5 menunjukkan warna coklat tua. Lanjutkan mengocok tabung dan perhatikan warnanya setiap lima menit selama 20 menit berikutnya.

Gunakan data yang Anda peroleh untuk pembacaan 20 menit untuk membuat grafik. Pada sumbu X, tunjukkan pH buffer. Pada sumbu Y, tunjukkan intensitas warna mulai dari 0 hingga 5. Untuk setiap nilai pH, tandai intensitas warna dan gabungkan tanda-tanda ini untuk mendapatkan grafik akhir. Cari puncak plot ini dan identifikasi pH optimum untuk reaksi katekol oksidase. Asalkan Anda telah melakukan percobaan dengan benar, nilai pH optimum adalah 7. Pada pH 7, enzim paling aktif dan dengan cepat mengkatalisis oksidasi katekol untuk memberikan warna coklat tua.

Pisang serta kentang mengandung katekol. Oleh karena itu, ada kemungkinan beberapa di antaranya teroksidasi selama reaksi, berkontribusi pada intensitas warna yang Anda amati. Untuk mencegah reaksi ini, simpan ekstrak katekol oksidase di atas balok es sebelum Anda menambahkannya ke dalam setiap tabung. Catekol beracun, jadi pastikan Anda tidak membiarkannya menyentuh kulit Anda. Jangan dipipet larutan katekol dan jika ada tumpahan gunakan sarung tangan untuk membersihkannya dengan menggunakan tisu.