A sejtkoncentráció kiszámítása

A tudósoknak és technikusoknak gyakran meg kell számolniuk a szuszpenzióban lévő sejtek koncentrációját. Például, amikor a betegnek az orvosi rendelőben leveszik a vérét, a laboratórium bizonyos módszerekkel meg tudja keresni a fehérvérsejtek mennyiségét egy adott vérmennyiségben. Ez sok információt nyújt az orvosnak a betegével kapcsolatos egészségi állapotról, különösen az immunrendszeréről és arról, hogy fertőzéssel vagy más betegséggel küzd-e. Az ilyen vizsgálatok sok más sejtet kereshetnek a vérben, valamint a gerincfolyadékot és más testfolyadékokat, például termékenységi célokra a spermában lévő spermasejteket. A tudósok számos célra kiszámítják a baktériumok, élesztők és más mikroorganizmusok sejtkoncentrációit, az ökológiai kutatásoktól az ipari technológiákig. Az egyik legelterjedtebb technikát sok egyetemi biológiai órán is tanítják, és egy számoló kamrának nevezett eszközt használ.

Mielőtt a sejtszuszpenzió bekerülhet a számláló kamrába, hígításra szorulhat, mert több ezer vagy millió sejtet tartalmazhat. Ebben az esetben a sejteket ésszerűen nem lehet megszámolni. A minta hígításához steril pipetta segítségével helyezzen tíz mikroliter sejtoldatot egy kémcsőbe, amely 90 mikroliter hígítószert tartalmaz. A hígítószer típusa a sejt típusától függ. Keverje jól össze. Ez az oldat most tízszer jobban hígított, mint a kezdeti minta, így hígítási tényezője 10

instagram story viewer
-1. Címkézze fel. Ismételje meg ezt többször, minden alkalommal steril pipettával, amíg az oldat kellően híg nem lesz. Ha másodszor hígítaná, akkor a második kémcső 100-szor jobban hígult, mint a kezdeti oldat, tehát a hígítási tényező 10-2 stb.

Előfordulhat, hogy több hígítást kell kipróbálnia a számláló kamra megfelelő hígítási tényezőjének meghatározásához. A számláló kamra alapvetően egy nagyon kicsi, tiszta, téglalap alakú doboz, amelynek mélysége pontos mélységgel és pontos rácsral van ellátva. Hemocitométerként vagy néha hemacitométerként is ismert. A cél az, hogy a szuszpenzió elég híg legyen ahhoz, hogy amikor a számláló kamrában nézzük, egyetlen sejt sem fedi át egymást, és egyenletesen oszlik el a rácson. Pipettázzuk a sejteket tartalmazó hígított szuszpenziót a számlálókamra mélyedésébe, ahol kapilláris hatással a rácskamrába telepedünk. Helyezze a számláló kamrát a mikroszkóp fokozatára, és nézze meg kis teljesítmény mellett.

A rács négyzeteket tartalmaz, amelyek még kisebb négyzetekből állnak. Válasszon körülbelül négy vagy öt négyzetet, vagy akármennyit is legalább 100 cellát kell megszámolnia, az Ön által választott mintában, például a négy sarokban és a középső négyzetben. Ha a cellák nagyok, akkor ezek lehetnek a nagy négyzetek, de ha a cellák kicsik, akkor inkább a kisebb négyzeteket választhatja.

Az egyes rács négyzetek fajlagos térfogata a számláló kamra gyártójától függően változhat, de a kamra mélysége gyakran 0,1 milliméter, a nagy négyzetek területe 1 négyzet milliméter, a kisebb négyzetek területe 0,04 négyzet milliméter. A nagyobb négyzetek térfogata tehát 0,1 köbmilliméter. Tegyük fel, hogy ebben a példában összesen 103 sejtet számolt öt négyzetben, és hogy a kezdeti mintát addig hígította, amíg a hígítási tényező 10 nem lett-2.

Ha minden rácsnégyzet térfogata 0,1 köbmilliméter, és ötöt megszámláltak, akkor a megszámlált kamra teljes térfogata 0,5 köbmilliméter volt, és 103 sejt volt. Megduplázva, hogy 1 köbmilliméter legyen, 206 sejt lesz. Egy köbcentiméter egyenértékű 1 milliliterrel, ami hasznos mérés a folyadékok esetében. Köbcentiméterben 1000 köbmilliméter van. Ezért, ha köbcentiméter vagy milliliter szuszpenzió lett volna, akkor 206 000 (206 x 1000) sejtet számolt volna. Így néz ki, mint egyenlet:

A rács négyzetének térfogata × a megszámolt négyzetek száma = a megszámlált szuszpenzió teljes térfogata

Sejtek száma ÷ megszámolt szuszpenzió térfogata = sejtszám / milliméter kockában

Sejtek száma milliméter kockában × 1000 = sejtszám / milliliter

Számolnia kell minden elvégzett hígítással, hogy a kezdeti oldat mikroszkóp alatt megszámolható legyen. Ebben a példában a hígítási tényező 10-2. Az oldat kezdeti koncentrációjának kiszámításához:

Sejtszám / milliliter ÷ hígítási tényező = sejtszint

Ebben a példában a milliliterenként a sejtszám 206 000, és ezt elosztva 10-vel-2 (0,01) 20 600 000 sejt / milliliter sejtkoncentrációt eredményez a kezdeti mintában.

Teachs.ru
  • Ossza meg
instagram viewer