Miután DNS-mintákat futtatott egy agaróz gélen, és képet készített, elmentheti a képet későbbre, amikor elemezheti és értelmezheti az eredményeket. A keresett dolgok fajtája a kísérlet jellegétől függ. Ha például DNS-ujjlenyomatot készít, érdemes összehasonlítania két minta - esetleg a gyanúsított és a bűncselekmény helyszínének mintája - DNS-darabjainak méretét. Ezzel szemben, ha baktériumokból származó plazmidokkal dolgozik, akkor biztos lehet abban, hogy a plazmid tartalmazza az inszertet. Következésképpen az, hogy hogyan értelmezi a gélt, részben az elvégzett kísérlettől függ. Ennek ellenére van néhány általános szabály, amelyet alkalmazhat.
Ne feledje, hogy lehet, hogy nem kell használnia az ebben a szakaszban található utasításokat. Agarose gélelektroforézist gyakran alkalmaznak annak megerősítésére, hogy egy plazmid tartalmaz egy adott inszertet. Ha nem plazmidokkal dolgozik, kihagyhatja ezt a részt. Ha mégis, akkor kövesse ezeket az utasításokat.
Figyelje meg, hogy ha vágatlan vagy leragasztott plazmidokkal dolgozik, akkor a fenti 1. szakaszban leírt eljárással nem tudja megbecsülni a méretet. Ez azért van, mert a vágatlan és a becézett plazmidok különböző sebességgel vándorolnak a lineáris DNS-től.
Hasonlítsa össze az egyes sávok sávjainak számát. Emlékezzünk arra, hogy egy restrikciós enzim olyan helyeken vágja le a DNS-t, ahol egy adott restrikciós helynek nevezett szekvencia előfordul. Ha egy mintát KÉT restrikciós enzimmel kezeltünk, akkor az inszertnek és a plazmid fennmaradó részének sávja egyaránt jelen kell lennie. Ez azért van, mert az inszertet két restrikciós hely szegélyezi, mindegyik más-más enzimre vonatkozik, így ezek a helyek mindkét helyen levágják az inszertet a plazmidtól. Ezzel szemben csak egy helyen levágva a plazmid lineáris DNS-vé alakul. A restrikciós enzim nélküli vagy egy restrikciós enzim nélküli kivágásnak egyetlen sávot kell tartalmaznia, míg a két restrikciós enzimmel kivágott mintának két sávot kell tartalmaznia.
Vigyázzon a nickelt plazmid DNS által létrehozott sávokra. A levágott plazmidnak csak egyetlen szála van elvágva, így lassabban vándorol, mint egy vágott plazmid. A vágott plazmidok viszont lassabban vándorolnak, mint a vágatlan DNS.
Becsülje meg a betét méretét az 1. szakaszban leírt eljárással, és állapítsa meg, hogy megfelel-e az elvárásainak (ami a kísérlettől függően változik).
Amire szükséged lesz
- Ceruza
- Papír
- Táblázatkezelő program
- A gél képe
- Vonalzó
