A TA klónozás egyszerű és kényelmes módszer a polimeráz láncreakció (PCR) termékek szubklónozására. A "TA" a "timin" és az "adenin" rövidítése. Ez a klónozási technika felhasználja a timin azon képességét, hogy ligázok jelenlétében hibridizáljon az adeninnel. A restrikciós enzimeket nem használják, ellentétben a hagyományos szubklónozási módszerrel. Ehelyett a PCR-termékeket Taq-polimeráz enzimek segítségével amplifikálják.
Módszer
A TA-klónozási módszer bizonyos dezoxiribonukleinsav-túlnyúlások terminális transzferáz aktivitását használja a PCR-termék mindkét végén.
Linearizált klónozóvektort egyetlen, három prím-T (3'-T) túlnyúlással, T-vektornak nevezünk, hogy ezt a PCR-terméket klónozzuk plazmid vektorba. A PCR-terméket nagy arányban keverjük össze ezzel a vektorral.
DNS-ligázt (T4 ligázt) adunk az elegyhez, amely lehetővé teszi a két termék hibridizálódását és csatlakozását.
Előnyök és hátrányok
A TA klónozás kényelmes módszer a PCR-termékek szubklónozására a linearizált vektorban, és sokkal egyszerűbb és gyorsabb, mint a hagyományos szubklónozási módszerek. Mivel ez a módszer nem használ restrikciós enzimeket, a restrikciós enzim helyek nélküli termékeket klónozni lehet.
Hátrány, hogy a TA klónozó készletek nagyon drágák, és ezért használatuk korlátozott. Emellett nincs irányított klónozás; így az ellenkező irányú klónozás valószínűsége nagyobb.
TA klónozó készletek
Számos gyártó forgalmaz TA klónozó készleteket. Néhány az Invitrogen, a QIAGEN és a Premier Biosoft.