A pufferoldatok ellenállnak a pH változásainak, mert gyenge sav-bázis konjugátumokat tartalmaznak, amelyek semlegesítik a H + és OH-ionokat. A pufferoldatok gyenge savakból vagy bázisokból és az adott sav vagy bázis sóiból állnak. A megfelelő pufferrendszer kiválasztása a pufferelés pH-tartományától függ. A legtöbb biológiai reakció 6 és 8 közötti pH-tartományban fordul elő. Foszfátpufferek pufferei a 6,5-7,5 pH-tartományban. A karbonsav-pufferek pH-ja 3-6. A borát pufferek pH-ja 8,5 és 10 között működik. Az aminosav-pufferek, mint például a glicin és a hisztidin, a pH-tartomány sokféleségében teljesítenek. A Tris puffer az egyik leggyakrabban használt puffer rendszer a biológiai laboratóriumokban. A következő példában egy Tris pufferoldat számítását használjuk, de a módszertan bármilyen pufferoldatra vonatkozik.
A szükséges bázis mol meghatározásához használja a végső oldat molaritásának és térfogatának szorzatát. Például, ha 2 liter 0,1 M Tris puffer oldatra van szükség, akkor a szükséges Tris mólok száma:
Számítsa ki a szükséges puffer tömegét úgy, hogy megszorozza a szükséges molok számát a bázis molekulatömegével. Például 0,2 mol Tris bázis tömege megegyezik:
Oldjuk fel az alapot desztillált vízben mágneses keverőrúd és keverőlap segítségével. Oldjuk fel olyan térfogatú vízben, amely csak valamivel kisebb, mint a végső oldat térfogata (950–975 ml minden liter végső oldathoz). A Tris puffer pH-ja a koncentrációval változik, és túl alacsony kezdeti térfogat használata esetén újra kell beállítani. Az is a legjobb, ha a puffert ugyanazon a hőmérsékleten készítjük el, mint amelyet a vizsgálat vagy a kísérlet során használunk, mivel a Tris pH-értéke nagy hőmérsékletfüggő.
Tippek
- A pufferoldat elkészítéséhez szükséges idő megtakarítása érdekében előre elkészített pufferkoncentrátumokat használhat a kívánt pH-n, és a kívánt molaritáshoz és térfogathoz hígíthatja. Készítsen pufferoldatot ugyanazon a hőmérsékleten, amelyet használni fognak a jelentős pH-változások elkerülése érdekében. Kerülje az időigényes pH-beállításokat, csak a kívánt koncentrációra történő hígítás után titrálja. Ha túl kicsi térfogatban oldjuk fel, ismételt titráláshoz vezetünk.
Figyelmeztetések
- Legyen óvatos savak és bázisok kezelésekor. Viseljen védőszemüveget.
A szerzőről
Carla Boulianne képzettségű evolúciós biológus, szenvedéllyel szabadúszó író. A Demand Studiosnak és az eHow-nak írása mellett a Suite101.com oldalán egy tehetséges gyermek szülője. Izgalmasan kutatja új témákat átfogó kutatás révén.
Fotók
Fotó: P. Emmi jóvoltából @ morgueFile.com