A nagy teljesítményű folyadékkromatográfia a keverék laboratóriumi elemzésének technikája. Ez egy hatékony típusú kromatográfia, amely egyszerűen gravitáció helyett nagy nyomást alkalmaz egy keverékminta oszlopon keresztül történő tolására. Mintát fecskendeznek be, majd egy nagy nyomást tartalmazó szivattyú segít a minta mozgatásában egy töltött oszlop mentén, ahol azt külön alkotórészekre osztják szét. Ezt az elválasztást detektor segítségével elemzik, hogy eredményeket kapjanak.
Injekció helye
Ahhoz, hogy egy HPLC-be injektálják, a mintát először fel kell oldani egy poláros folyékony oldószerben, előnyösen ismert HPLC-spektrummal rendelkező oldószerben, hogy annak adatait meg lehessen különböztetni a mintától. A mintát tartalmazó folyékony oldatot a készülékbe helyezzük, és az oszlopba küldjük. Az injekció beadásának helye a készülék márkájától függ. A legtöbb esetben az injektálási folyamat automatizált, de egyes esetekben egy laboratóriumi dolgozónak egy kis fecskendőtű segítségével kell beadnia a mintát.
Szivattyú alkatrész
A HPLC egység szivattyúkomponensére azért van szükség, mert ez biztosítja a nyomást, amely a mintát az oszlopon keresztül hajtja. A szivattyú erőssége változó, de egy erőteljes 6000 psi (font / négyzet hüvelyk) nyomást eredményezhet, amelyet a minta beadása után alkalmaznak. Ez lehetővé teszi a minta gyorsabb és hatékonyabb áthaladását az oszlopon, mintha csak a gravitációs erő alkalmazásával csöpögne át.
Oszlop leírása
A szivattyú által az oszlopon áthaladt minta megnövekedett sebessége más típusú oszlopok használatát teszi lehetővé, mint az egyszerű folyadékkromatográfiában. Az oszlopban lévő csomagolóanyag részecskemérete sokkal kisebb lehet, ami megnöveli a felületet, és így elősegíti a minta és az oszlop kölcsönhatását. A legtöbb HPLC oszlop polaritással működik. A mintát feloldjuk egy poláros oldószerben, és az oszlop nagyrészt nem poláros szénhidrogénekből áll. A minta molekula poláris részei nagyon gyorsan áthaladnak az oszlopon, mert elsősorban kölcsönhatásba lépnek a molekulával oldószer, míg a minta nem poláros komponensei az oszlopban maradnak, gyenge kölcsönhatást képezve az oszloppal alkatrészek. Ezért a minta komponensei az oszlopról sorrendben kerülnek le a poláris és a legtöbb nem poláros között.
Detektor funkció
A detektorok a használt HPLC készülék típusától függően is változhatnak. A legtöbb azonban ugyanúgy működik. Az elválasztott mintakomponensek ultraibolya fényforrása ragyog, amikor azok az oszlopról lejönnek. A legtöbb szerves vegyület elnyel egy bizonyos mennyiségű fényt, így amikor áthalad az alkalmazott fénysugár mellett, egy detektor fel tudja venni, hogy mennyi fény szívódik fel. A detektor rögzíti az alkatrészek retenciós idejét is az oszlopról való sorrend alapján. Ezt a kimenetet a csúcsterület alapján elemezhetjük, hogy meghatározzuk a minta összetevőinek pontos jellegét.