Izračunavanje titra za virus složen je način da se kaže da znanstvenik broji broj virusa u određenom uzorku. Da bi izračunali titre virusa, znanstvenici zaraze pločice rastućih bakterija virusnim otopinama u različitim koncentracijama i shvatiti broj virusa u izvornoj otopini brojeći bakterije koje su umrle zbog virusa infekcija.
Stavite rukavice, napunite 10 epruveta s 9 ml bujona i označite ih "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" i tako do "10 ^ -10." Te će se epruvete koristiti za serijska virusna razrjeđenja koja se koriste za izračunavanje faga titar. Budući da virusi mogu narasti do nevjerojatno visokih koncentracija, morate ih razrijediti kako biste ih učinkovito brojali. Svaka epruveta predstavlja deseterostruko razrjeđenje virusa.
Uzmite 1 ml miješane kulture iz epruvete s oznakom "10 ^ -1" i prenesite je novom pipetom u sljedeću epruvetu s oznakom "10 ^ -2". Pomiješajte i ovu tubu.
Nastavite s ovim uzorkom kako biste stvorili serijsku seriju razrjeđenja. Na kraju ćete dobiti 9 epruveta od 9 ml i 1 tubu od 10 ml. Virusno opterećenje u vašim cjevčicama razrijedit će se negdje od 10 puta (prva cijev) ili 100 puta (druga cijev) do deset milijardi puta (zadnja cijev).
U svoj agar dodajte dvije kapi bakterijske kulture i lagano ga promiješajte. To su bakterije koje će biti ubijene, što vam omogućuje da izbrojite broj čestica virusa u određenoj otopini.
Dodajte 1 ml svakog serijskog razrjeđenja u odgovarajuću agar cijev dok su epruvete još uvijek u kupki s vrućom vodom. Na primjer, 1 ml vašeg 10 ^ -1 serijskog razrjeđenja treba ići u agar cijev s oznakom "10 ^ -1".
Pomiješajte svaku epruvetu i zatim ulijte svaku epruvetu u Petrijevu pločicu s odgovarajućom naljepnicom. To će stvoriti tanki sloj agara koji je cijepljen bakterijama i virusima u svakoj ploči. Pustite da ploče rastu preko noći u inkubatoru.
Izvadite svoje tanjure iz inkubatora i pregledajte ih. Na cijeloj ploči trebali biste vidjeti oblačna područja na kojima su rasle bakterije, osim malih prozirnih mjesta koja se nazivaju plakovi. Ovi plakovi su mrlje mrtvih bakterija, a svaki plak predstavlja jedan virus.
Uzmite broj pločica na tanjuru i pomnožite s 10. Da izbrojite 157 plaketa, dobili biste 1570.
Pomnožite broj koji ste dobili u prethodnom koraku s obrnutim brojem na cijevi za razrjeđivanje. Na primjer, ako je ploča koju ste odabrali ploča 10 ^ -5, pomnožili biste 1570 s 10 ^ 5 da biste dobili 157000000. Ovaj konačni broj je vaš titar faga i predstavlja broj virusa po ml vaše izvorne kulture.