Tijekom tankoslojne kromatografije tehničar postavlja mrlje kemijske smjese na ravnu ploču presvučenu slojem upijajućeg materijala, a zatim donji dio ploče smješta u otapalo. Kako se otapalo pomiče prema ploči, kemikalije u smjesi pomiču se zajedno s njim različitim brzinama, pa se razdvajaju. Ovaj test određuje koje su kemikalije u smjesi uspoređujući stope putovanja nepoznatih s poznatim standardima. Međutim, na rezultate mogu utjecati mnogi čimbenici.
TL; DR (predugo; Nisam pročitao)
Na vrijednosti faktora zadržavanja u tankoslojnoj kromatografiji utječu apsorbent, otapalo, sama kromatografska ploča, tehnika nanošenja i temperatura otapala i ploče.
Čimbenici zadržavanja
Retencijski faktor za kemikaliju tijekom tankoslojne kromatografije mjera je koliko se pomiče prema ploči kao odgovor na kretanje otapala. Budući da apsolutno kretanje kemikalije ovisi o tome koliko daleko putuje otapalo, izračunavate vrijednosti faktora zadržavanja u odnosu na stupanj kretanja otapala. Retencijski faktor za kemikaliju je vertikalna udaljenost koju je kemikalija pomaknula od mjesta na kojem je bila izvorno nanesena na ploču, podijeljena s udaljenostom koju je prešlo otapalo - mjereno od istog početka točka.
Tankoslojna kromatografska ploča
Tankoslojna kromatografska ploča može utjecati na vrijednost faktora zadržavanja dobivenu za određenu kemikaliju. Tankoslojne pločice za kromatografiju mogu biti presvučene raznim upijajućim krutinama; najčešće silicijev dioksid ili glinica. Budući da se retencijski faktor temelji na relativnom afinitetu kemikalije za apsorbent u usporedbi s otapalom, promjena apsorbenta može uvelike promijeniti faktor retencije. Također, debljina i jednolikost sloja apsorbenta mogu se razlikovati od ploče do ploče, posebno ako su ručno izrađeni. Ovi čimbenici također mogu promijeniti vrijednost faktora zadržavanja za kemikalije.
Čimbenici zadržavanja utjecaja otapala
Budući da otapalo nosi kemikaliju na pločicu, određeno otapalo koje se koristi također će imati značajan utjecaj na vrijednost faktora zadržavanja kemikalije. Otapalo koje ima jaču interakciju s određenom kemikalijom lakše će ga nadvladati afinitet kemikalije za upijajući sloj i pomaknite tu kemikaliju dalje u određenom razdoblju od vrijeme. Smjese otapala također mogu imati različite učinke, ovisno o udjelu svakog otapala.
Ostali čimbenici
Postoji nekoliko drugih čimbenika koji u nekim slučajevima mogu utjecati na faktor zadržavanja. Temperatura otapala i ploče može napraviti male promjene, jer, na primjer, otapalo često može bolje otopiti kemikalije koje prevozi na višim temperaturama. Tehnika nanošenja uzorka na ploču može također promijeniti faktor zadržavanja. Primjena previše uzorka može rezultirati velikim, difuznim trakama kemikalije koje se pomiču prema ploči, što otežava precizno mjerenje udaljenosti koja je kemikalija prevezena.