Postoji mnogo metoda za razdvajanje i identificiranje različitih spojeva. Kromatografija je znanost koja vam omogućuje razdvajanje komponenata smjese. The Rf (ponekad neformalno zapisano kao "RF vrijednost") dio je toga.
Postoji mnogo različitih vrsta kromatografije. Ovdje je fokus na najjednostavnijoj vrsti kromatografije: kromatografiji na papiru ili tankoslojnoj kromatografiji (TLC). Oboje koriste isti opći postupak, koji je opisan u nastavku.
Što kromatografija uključuje?
Sve vrste kromatografije imaju stacionarna faza i a mobilna faza. Stacionarna faza, kao što biste mogli pogoditi iz imena, ne pomiče se. U papirnoj kromatografiji stacionarna faza je sam papir.
Da bi se započelo odvajanje spojeva, supstanca koja se analizira nalazi se na donjem rubu papira. Tada se papir stavlja u čašu koja sadrži mobilnu fazu, koja je otapalo. Otapalo treba biti ispod mjesta na kojem je supstanca za analizu točkasta. Ne bi trebao potopiti analit.
Tekućina se kapilarno pomiče prema papiru. Ako analit ili dio analita privlači pokretna faza, on će se pomicati s njom. Ako ima jaču privlačnost za stacionarnu fazu, neće se pomaknuti.
Nakon što se otapalo donekle pomaklo prema nepokretnoj fazi, imate kromatogram. Ovaj kromatogram govori vam nešto o razdvajanju različitih komponenata u smjesi ili vam govori o tome koju tvar imate. Kako?
Odvajanje i prepoznavanje komponenata pomoću kromatograma
Ako su uvjeti za razvijanje kromatograma jednaki, tada bi se trebala promijeniti udaljenost koju određena tvar pomiče. Ova udaljenost mjeri se s formula faktora zadržavanja ili Rf.
Formula retencijskog faktora je:
Ova vrijednost trebala bi biti ista za tvar kada se kromatogram razvija na isti način.
To je korisno kada imate mješavinu tvari.
Na primjer, recimo da imate četiri uzorka: tri su standardi, a jedan smjesa. Vaš je posao utvrditi koje su komponente u smjesi.
Što su standardi? Standardi su čisti uzorak tvari. To se može usporediti na kromatogramu.
Smjesa se može pokretati, nakon čega možete odrediti koliko različite komponente u njoj rade.
Recimo da Standard # 1 ima snažan afinitet za vodu (mobilna faza). To znači da će s mobilnom fazom putovati po papiru. Standard # 2 s druge strane ima snažan afinitet prema papiru. To znači da će ostati u stacionarnoj fazi. I na kraju, Standard # 3 ima afinitet i prema vodi i prema papiru. Predviđate da će premjestiti srednji iznos.
Otkrili ste da se otapalo pomiče za 5,7 cm, dok se Standard # 1 pomiče za 0,5 cm, Standard # 2 pomiče za 4,8 cm, a Standard # 3 za 2,9 cm. Koji su R.f vrijednosti za svaki standard?
Sada znate Rf vrijednosti za standarde. Zatim na drugi papir stavite točku smjese i pustite da se kromatogram razvije stavljajući ga u vodu.
Jednom uklonjeni, ustanovite da postoje dvije točke koje se odvajaju od početne točke koju ste postavili. To vjerojatno znači da u vašoj smjesi postoje samo dvije komponente. Dalje, morate shvatiti kojem od standarda odgovaraju ove dvije komponente. Da biste to učinili, izmjerite Rf vrijednosti.
Otapalo se pomaklo za 4,5 cm. Jedna komponenta (nazvana komponenta 1) pomaknula se za 2,2 cm, a druga za 3,9 cm (nazvana komponenta 2). Da biste vidjeli kojem standardu odgovaraju ove komponente, morat ćete upotrijebiti formulu retencijskog faktora za izračun Rf vrijednosti.
S obzirom na ove Rf vrijednosti, vjerojatno je da komponenta 1 odgovara standardu # 3 budući da Rf vrijednosti su vrlo slične. Komponenta 2 vjerojatno je Standard # 2.