जेल वैद्युतकणसंचलन लैब प्रक्रियाएं

जेल वैद्युतकणसंचलन एक विधि है जिसका उपयोग प्रयोगशालाओं में डीएनए के किस्में को मापने और क्रमबद्ध करने के लिए किया जाता है। यह आवश्यक है क्योंकि सामान्य परिस्थितियों में डीएनए में हेरफेर करने के लिए बहुत छोटा है, भले ही अधिकांश सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करके देखा गया हो। जेल वैद्युतकणसंचलन प्रयोगशाला अपेक्षाकृत सरल प्रक्रिया का उपयोग करती है, और उसी मूल तकनीक का उपयोग व्यक्तिगत प्रोटीन को अलग करने के लिए भी किया जा सकता है।

जेल वैद्युतकणसंचलन प्रक्रिया शुरू करने के लिए, आपको पहले जेल बनाना होगा। आमतौर पर, जैल पतली चादरों में agarose नामक पदार्थ का उपयोग करके बनाए जाते हैं। पाउडर agarose एक फ्लास्क में रखा जाता है, उसके बाद एक खारे पानी का घोल होता है जिसे बफर कहा जाता है। agarose और बफर के इस मिश्रण को तब तक गर्म किया जाता है जब तक कि दोनों पदार्थ एक साथ पिघल न जाएं, फिर एक सांचे में डाल दें। जेल के ठंडा होने से पहले एक उपकरण जिसे कंघी कहा जाता है, को मोल्ड के एक सिरे पर रखा जाता है। जब जेल को ठंडा किया जाता है, तो कंघी को हटा दिया जाता है, जिससे छोटे स्लॉट निकल जाते हैं जिनका उपयोग डीएनए नमूनों को रखने के लिए किया जाएगा।

ठंडा agarose मिश्रण (जेल मैट्रिक्स कहा जाता है) की एक विशेष विशेषता इस तथ्य से उपजी है कि इसे खारे पानी से बनाया गया है। विद्युतीकृत होने पर, मैट्रिक्स प्रवाहकीय हो जाएगा, जिससे बिजली अपनी लंबाई के साथ प्रवाहित हो सकेगी। जेल मैट्रिक्स की एक और विशेष संपत्ति नियमित, सूक्ष्म छिद्रों की उपस्थिति है। ये छेद डीएनए के स्ट्रैंड को जेल मैट्रिक्स के माध्यम से यात्रा करने और छँटाई प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाने की अनुमति देंगे।

आपका अगला कदम वैद्युतकणसंचलन कक्ष बनाना है। यह एक छोटा आयताकार बॉक्स है, जिसके दोनों छोर पर एक सकारात्मक और नकारात्मक विद्युत कनेक्शन होता है। चैंबर आमतौर पर उथले होते हैं, टेबलटॉप पर फिट होने के लिए काफी छोटे होते हैं, और प्लेक्सीग्लस जैसी स्पष्ट सामग्री से बने होते हैं।

खारे पानी का घोल वैद्युतकणसंचलन कक्ष के तल में डाला जाता है, और जेल मैट्रिक्स इस घोल में थोड़ा डूबा हुआ है। खारे पानी के दो उद्देश्य होते हैं: बिजली के प्रवाह में सहायता करना और जेल मैट्रिक्स को नम रखना। चूंकि डीएनए एक नकारात्मक चार्ज द्वारा संचालित होता है, इसलिए अपना मैट्रिक्स रखें ताकि आपके नमूने आपके नकारात्मक विद्युत कनेक्शन के बगल में स्थित हों।

इसके बाद डीएनए सैंपल तैयार किए जाते हैं। चूंकि समाधान में डीएनए देखना असंभव है, इसलिए प्रत्येक व्यक्तिगत नमूने में लोडिंग बफर नामक एक रंग एजेंट जोड़ा जाता है। यह एजेंट डीएनए के घोल को गाढ़ा भी करता है, जिससे यह कम बहता है और अधिक काम करने योग्य होता है। एक पिपेट का उपयोग करके, जेल मैट्रिक्स में प्रत्येक वैकल्पिक स्लॉट में डीएनए समाधान का एक नमूना स्थानांतरित करें। प्रयोग नियंत्रण और तुलना के लिए प्रत्येक नमूने के बीच खाली स्लॉट में, डीएनए का कुछ समाधान रखें जिसकी लंबाई आप पहले से जानते हैं (डीएनए मानक कहा जाता है)।

अब, अपने वैद्युतकणसंचलन कक्ष को चालू करें। नकारात्मक शक्ति के तहत, आपके डीएनए नमूनों को कक्ष की पूरी लंबाई में मजबूर किया जाएगा। डीएनए की छोटी किस्में जेल मैट्रिक्स के माध्यम से अधिक तेज़ी से आगे बढ़ेंगी, और थोड़े समय में वे खुद को लंबे, धीमे स्ट्रैंड से अलग कर लेंगी। कलरिंग एजेंट में डाई आपको डीएनए के ट्रैक का अनुसरण करने देती है। आप डीएनए के अलग-अलग स्ट्रैंड नहीं देख पाएंगे, लेकिन एक ही लंबाई के स्ट्रैंड आपस में टकराएंगे।

जब डीएनए को सुलझाया जाता है, तो मैट्रिक्स को वैद्युतकणसंचलन कक्ष से हटा दिया जाता है। फिर डीएनए को आसान माप और परीक्षा की अनुमति देने के लिए दाग दिया जाता है।