स्पूलिंग विधि द्वारा डीएनए निष्कर्षण

डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन। डीएनए को जीन नामक इकाइयों में व्यवस्थित किया जाता है, जिनमें से प्रत्येक एक विशेष आरएनए या प्रोटीन अनुक्रम के लिए कोड होता है। जैविक संरचना और कार्य, विकास, रोग और जीवित प्रणालियों के कई अन्य पहलुओं के बारे में जानने के लिए जीन का अध्ययन किया जाता है। जीन का विस्तार से अध्ययन करने के लिए, डीएनए को अलग किया जाना चाहिए और ब्याज की कोशिकाओं से शुद्ध किया जाना चाहिए।

हालांकि एक कोशिका से डीएनए निकाला जा सकता है और उसका अध्ययन किया जा सकता है, लेकिन यह नग्न आंखों से देखने के लिए पर्याप्त नहीं है। स्पूलिंग के लिए पर्याप्त मात्रा प्राप्त करने के लिए, आपको जितनी अधिक कोशिकाओं के साथ काम करना होगा, बेहतर (कई लाखों)।

विशिष्ट नमूनों की अनूठी विशेषताओं के लिए सटीक प्रोटोकॉल काफी भिन्न होते हैं, लेकिन सामान्य चरण समरूपीकरण, लसीका, पाचन, पृथक्करण और संग्रह हैं। प्रक्रिया को एक छोटे (नमूने के आकार के आधार पर) कांच या प्लास्टिक ट्यूब में सबसे अच्छा किया जाता है।

कोशिकाओं को एक दूसरे से पूरी तरह से अलग करने के लिए एक नमूना आम तौर पर मिश्रित या ग्राउंड-अप होता है। यह सेल सामग्री को उन अभिकर्मकों के लिए अधिक सुलभ बनाता है जो अनुसरण करते हैं। डीएनए को मुक्त करने के लिए कोशिका झिल्ली (और परमाणु झिल्ली यदि कोशिकाएं यूकेरियोटिक हैं) को नष्ट करने के लिए डिटर्जेंट या एंजाइम को होमोजेनेट में जोड़ा जाता है। इस बिंदु पर, डीएनए प्रोटीन, लिपिड, कार्बोहाइड्रेट से घिरा हुआ है, बाकी सब कुछ जो कोशिकाओं में निहित था।

प्रोटीन को तोड़ने के लिए एक और एंजाइमेटिक पाचन आवश्यक हो सकता है ताकि वे डीएनए से बंधे न हों और इसके संग्रह में हस्तक्षेप न करें। ठंडा, शुद्ध, एथिल या आइसोप्रोपिल अल्कोहल जोड़कर डीएनए को बाकी सेल सामग्री से अलग किया जाता है। इन अल्कोहल में डीएनए घुलनशील नहीं है, इसलिए यह अल्कोहल के साथ अपने संपर्क को कम करने की कोशिश करने के लिए संघनित होगा। संघनित डीएनए तब एकत्र किया जाता है, आमतौर पर सेंट्रीफ्यूजेशन या स्पूलिंग द्वारा।

जब एक निष्कर्षण प्रक्रिया से बड़ी मात्रा में डीएनए प्राप्त होता है तो स्पूलिंग द्वारा डीएनए संग्रह प्रभावी होता है। यह एक उत्कृष्ट प्रदर्शन विधि भी है क्योंकि शुद्ध डीएनए की एक प्रभावशाली उलझन स्पष्ट रूप से दिखाई देती है।

स्पूल डीएनए के लिए पृथक्करण कदम सावधानी से किया जाना चाहिए। यदि यह पहले से जोड़े गए lysis अभिकर्मक मिश्रण का हिस्सा नहीं था, तो अल्कोहल जोड़ने के चरण से पहले एक केंद्रित नमक समाधान (सोडियम क्लोराइड) को समाधान में जोड़ा जाना चाहिए। मिश्रण से बचने के लिए, जलीय घोल के ऊपर एक परत बनाने के लिए ठंडी शराब को धीरे-धीरे परखनली के किनारे पर डाला जाता है। अगर सही तरीके से किया जाए, तो नमकीन परत के ऊपर अल्कोहल की अपनी परत बन जाएगी। इसके बाद स्पूलिंग आती है।

नमकीन परत से डीएनए एकत्र करने के लिए, अल्कोहल की परत के माध्यम से एक ग्लास स्टिर रॉड को सावधानी से तब तक रखें जब तक कि वह ट्यूब के निचले हिस्से को न छू ले। दो परतों के बीच के इंटरफेस को देखते हुए, धीरे-धीरे रॉड को उंगलियों के बीच घुमाएं। यदि पर्याप्त डीएनए मौजूद है, तो यह एक दूधिया पारभासी द्रव्यमान बनाने के लिए परतों के बीच इंटरफेस में एक साथ टकराएगा। इसके चारों ओर डीएनए लपेटने के लिए रॉड को घुमाएं (जो स्पूलिंग भाग है) और इसे ट्यूब से बाहर निकालें। भंडारण या आगे के विश्लेषण के लिए डीएनए को शुद्ध शराब की दूसरी ट्यूब में स्थानांतरित किया जा सकता है।