एक माइक्रोबायोलॉजिस्ट चिटिन स्टेनिंग का उपयोग करता है ताकि वह माइक्रोस्कोप के नीचे कवक को स्पष्ट रूप से देख सके। कवक अपनी कोशिका भित्ति में संरचनात्मक सामग्री के रूप में काइटिन का उपयोग करते हैं इसलिए दाग कोशिका की दीवार को अच्छी तरह से दिखाता है। लैक्टोफेनॉल कॉटन ब्लू स्टेन कवक के लिए सबसे आम दाग है। फिनोल सूक्ष्मजीवों को मारता है और कवक एंजाइमों को कोशिका को तोड़ने से रोकता है। कॉटन ब्लू डाई चिटिन को नीला कर देती है। सस्ती सामग्री के साथ काइटिन धुंधला एक अपेक्षाकृत सरल प्रक्रिया है। आप या तो अपनी खुद की डाई बना सकते हैं या व्यावसायिक रूप से तैयार दाग खरीद सकते हैं।
लैक्टोफेनॉल कॉटन ब्लू का घोल तैयार करें। एक संवेदनशील तौल पैमाने का उपयोग करके 0.05 ग्राम सूती नीले रंग को तौलें। डाई को एक परखनली में 20 मिलीलीटर आसुत जल के साथ मिलाकर रात भर छोड़ दें।
अगले दिन दाग की तैयारी खत्म करने से पहले दस्ताने पहनें। एक बीकर में 20 मिली लैक्टिक एसिड रखें और इसे 20 ग्राम फिनोल क्रिस्टल के साथ मिलाएं। मिश्रण के घुलने तक हिलाएं। ४० मिली ग्लिसरॉल डालें और मिलाएँ। फिर सूती नीले घोल को फिल्टर पेपर के एक टुकड़े के माध्यम से बीकर में छान लें और अच्छी तरह मिला लें।
वैकल्पिक रूप से, दाग के व्यावसायिक रूप से तैयार स्रोत का उपयोग करें। दाग को कमरे के तापमान पर स्टोर करें।
नमूना पहचान नाम या संख्या के साथ माइक्रोस्कोप स्लाइड को लेबल करें। माइक्रोस्कोप स्लाइड के केंद्र पर पानी के नमूने की एक बूंद डालने के लिए एक बाँझ ड्रॉपर का प्रयोग करें। सूखे नमूने के लिए, ७० प्रतिशत अल्कोहल समाधान की एक बूंद को स्लाइड पर रखें, और फिर सूखे नमूने को अल्कोहल में मिलाने के लिए एक बाँझ लूप का उपयोग करें।
स्लाइड के केंद्र पर लैक्टोफेनॉल कॉटन ब्लू स्टेन की दो बूंदों को स्थानांतरित करने के लिए एक साफ ड्रॉपर का उपयोग करें। यदि आप स्लाइड पर 70 प्रतिशत अल्कोहल का उपयोग कर रहे हैं, तो स्लाइड से अल्कोहल वाष्पित होने से पहले ऐसा करें।
माइक्रोस्कोप कवर स्लिप के एक किनारे को गीला नमूना तैयार करने के एक किनारे पर स्पर्श करें। नमूना तैयार करने पर पर्ची को धीरे से गिरने दें, यह सुनिश्चित करते हुए कि आप स्लाइड के नीचे कोई हवाई बुलबुले नहीं फँसाएँ। सना हुआ नमूना अब माइक्रोस्कोप के तहत जांच के लिए तैयार है।