पेट्री डिश में बैक्टीरिया एक ठोस माध्यम पर उगाए जाते हैं जिसे बैक्टीरियल एगर कहा जाता है, जहां उभरी हुई, गोलाकार कॉलोनियां बनती हैं। एक व्यक्तिगत जीवाणु कोशिका के विपरीत, एक कॉलोनी बैक्टीरिया का एक समूह है जो नग्न आंखों को दिखाई देने के लिए काफी बड़ा है। कितनी कॉलोनियां मौजूद हैं, इसका सरल अवलोकन करके जीवाणु वृद्धि को मापा जा सकता है; हालांकि, अधिक मात्रात्मक तरीकों में एक गिनती कक्ष का उपयोग, या अधिक बार, व्यवहार्य प्लेट गणना शामिल है। उत्तरार्द्ध का सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है क्योंकि यह गुणात्मक जानकारी भी प्रदान करता है जैसे कि बदलती विकास स्थितियों का प्रभाव। चूंकि पेट्री डिश में अरबों बैक्टीरिया हो सकते हैं, इसलिए पहले मापने के लिए नमूने को पतला करने की आवश्यकता होती है ताकि कॉलोनियों की संख्या गिनना संभव हो।
एक परखनली में, प्रारंभिक जीवाणु संवर्धन के १० माइक्रोलीटर को ९० माइक्रोलीटर कमजोर पड़ने वाले माध्यम में मिलाएं। एक सजातीय मिश्रण प्राप्त करने के लिए ट्यूब के ढक्कन को कसकर और भंवर को धीरे से बंद करें। अब नमूना इसकी मूल सांद्रता का दसवां हिस्सा है।
इस नए नमूने के 10 माइक्रोलीटर को एक नई परखनली में स्थानांतरित करें जिसमें 90 माइक्रोलीटर कमजोर पड़ने वाला माध्यम है, इसे फिर से मिलाएं। एक बार फिर, परिणाम नमूना और अधिक पतला होगा - अब यह अपनी मूल एकाग्रता का सौवां हिस्सा होगा। इसे कई बार दोहराएं, जब तक कि मूल नमूना 10. के बीच पतला न हो जाए
पिछले कमजोर पड़ने के 10 माइक्रोलीटर को आगर प्लेट पर पूरा करें। फैलते हुए किनारे का उपयोग करके, अगर प्लेट की पूरी सतह पर जीवाणु समाधान वितरित करें। इसे दो और प्लेटों के लिए दोहराएं। तुलना के लिए कमजोर पड़ने के अन्य स्तरों के साथ इन चरणों को करना भी आम है। प्लेटों के बॉटम्स को लेबल करना सुनिश्चित करें। प्रत्येक प्लेट पर ढक्कन बदलें और आगर प्लेटों को या तो एक प्रयोगशाला बेंच पर एक लौ के नीचे, या एक इनक्यूबेटर में कई मिनट के लिए सूखने दें। प्लेटों को इनक्यूबेटर में रखें जिसे बैक्टीरिया के तनाव के लिए उपयुक्त तापमान पर सेट किया जाना चाहिए। 12 से 16 घंटे तक बढ़ने के लिए छोड़ दें।
कालोनियों को 16 घंटे के बाद दिखाई देना चाहिए; हालांकि, कुछ आनुवंशिक संशोधनों के लिए अधिक समय की आवश्यकता हो सकती है (उदाहरण के लिए, रंग विकास)। जब कॉलोनियों को देखा जा सकता है, तो प्लेटों को बाहर निकालें और उन प्लेटों को खोजें जिनमें 30 से 300 कॉलोनियां हों। स्थायी मार्कर का उपयोग करते हुए, पेट्री डिश के तल पर एक बिंदु रखें - अग्र के साथ पक्ष, ढक्कन नहीं - जहां भी एक कॉलोनी अगर के माध्यम से दिखाई दे रही है। प्रत्येक मार्कर डॉट गिनें। प्रत्येक डिश के लिए दोहराएं।
इस प्रयोग के लिए प्रारंभिक संस्कृति में बैक्टीरिया की मात्रा को मापने के लिए, गणना में कमजोर पड़ने को दो स्थानों पर उलटने की जरूरत है। सबसे पहले, जब आपने पेट्री डिश में डालने के लिए टेस्ट ट्यूब से एक माइक्रोलीटर लिया, तो आपने पतला नमूना का दसवां हिस्सा लिया, इसलिए आपको इसे उलटने के लिए हर चीज को 10 से गुणा करना होगा। इसके अलावा, अगर टेस्ट ट्यूब में कमजोर पड़ने वाला कारक था, उदाहरण के लिए, 10-7, तो कॉलोनियों की संख्या को 10. से गुणा करना होगा7 कमजोर पड़ने के प्रभाव को उलटने के लिए। बस गणना में घातांक से ऋणात्मक चिह्न हटा दें। सूत्र का प्रयोग करें:
[गणना की गई कॉलोनियों की संख्या] × १० × [मूल एकाग्रता प्राप्त करने के लिए नमूने को कितनी बार गुणा करना चाहिए: उदाहरण के लिए, १०5] = प्रारंभिक संस्कृति के प्रति मिलीलीटर कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की संख्या। यह आपके पेट्री डिश में जीवाणु वृद्धि है।