Lysis बफ़र्स के अवयव

Lyse एक शब्द है जो ग्रीक से आया है और इसका अर्थ केवल "विभाजित करना" या "फटना" है एक lysis बफर में कोशिकाओं के साथ क्या होता है, एक समाधान जो उन्हें उनके निकालने के लिए खुला तोड़ देता है सामग्री। विश्लेषण के लिए कोशिकाओं से डीएनए या प्रोटीन निकालते समय वैज्ञानिक लसीका बफर का उपयोग करते हैं, खासकर बैक्टीरिया के मामले में। सेल लिसिस बफर का प्रकार प्रयोग के प्रकार के आधार पर भिन्न होता है, हालांकि निम्नलिखित कुछ सामान्य विकल्प हैं।

टीएल; डीआर (बहुत लंबा; पढ़ा नहीं)

Lysis बफ़र्स खुली हुई कोशिकाओं को तोड़ने में मदद करते हैं, इसलिए उनकी सामग्री तक पहुँचा या हटाया जा सकता है। कुछ उदाहरणों में नमक, डिटर्जेंट, चेलेटिंग एजेंट और अवरोधक, और कुछ क्षारीय रसायन शामिल हैं।

कोशिकाएं विभाजित होने पर बफर पीएच को स्थिर करते हैं। ट्रिस-एचसीएल पीएच 8 पर बफरिंग के लिए सबसे आम रसायनों में से एक है। इन प्रयोगों में HEPES एक अन्य सामान्य बफर रसायन है। सोडियम क्लोराइड नमक भी आयनिक शक्ति बढ़ा सकता है, कोशिकाओं के बाहर विलेय की कुल सांद्रता। इस अंतिम बिंदु का कुछ महत्व है क्योंकि पानी कम विलेय सांद्रता वाले क्षेत्रों से उच्च विलेय सांद्रता वाले क्षेत्रों में कोशिका झिल्ली में फैल सकता है।

डिटर्जेंट कोशिका झिल्ली को भंग कर देते हैं ताकि कोशिका की सामग्री बच सके। है और एम्फीपैथिक आणविक संरचना (यानी, एक छोर के साथ अणु जो पानी के अणुओं के साथ आसानी से बातचीत करते हैं जबकि दूसरा हाइड्रोफोबिक या "पानी से डरने वाला" अंत नहीं होता है)। वे मिसेल, छोटे क्लस्टर बनाकर वसा को भंग कर सकते हैं जहां डिटर्जेंट अणुओं की हाइड्रोफोबिक पूंछ वसा अणुओं की ओर इशारा करती है। सामान्य डिटर्जेंट में सोडियम डोडेसिल सल्फेट, या एसडीएस, एनपी -40 और ट्राइटनएक्स शामिल हैं।

Lysis बफ़र्स में आमतौर पर एथिलीनडायमिनेटेट्राएसेटिक एसिड (EDTA) या एथिलीन ग्लाइकॉल टेट्राएसिटिक एसिड (EGTA) जैसे चेलेटिंग एजेंट शामिल होते हैं। ये रसायन धातु आयनों को दो धनात्मक आवेशों (जैसे, मैग्नीशियम और कैल्शियम) से बांधते हैं, जिससे वे अन्य प्रतिक्रियाओं के लिए अनुपलब्ध हो जाते हैं। कई डीएनए (प्रोटीन जो डीएनए को चबाते हैं) और प्रोटीज (प्रोटीन जो अन्य प्रोटीन को काटते हैं) को मैग्नीशियम आयनों की आवश्यकता होती है कार्य करते हैं, इसलिए उन्हें इस प्रमुख घटक से वंचित करके, EDTA और EGTA प्रोटीज या डीएनए के स्तर को कम करने में मदद करते हैं। गतिविधि। हालांकि, वे इसे पूरी तरह से खारिज नहीं करते हैं, और कुछ प्रोटीज़ मैग्नीशियम कॉफ़ैक्टर्स पर निर्भर नहीं होते हैं, इसलिए लसीका बफ़र्स कभी-कभी प्रोटीज इनहिबिटर नामक रसायन भी शामिल होते हैं, जो प्रोटीज से बंधते हैं और उन्हें काम करने से रोकते हैं अच्छी तरह से।

बैक्टीरिया से प्लास्मिड को शुद्ध करने की एक बहुत ही सामान्य तकनीक क्षारीय लसीका में तीन समाधान शामिल हैं। पहले वाले में ग्लूकोज, ट्रिस-एचसीएल बफर, ईडीटीए और आरएनएएस होते हैं। ग्लूकोज बैक्टीरिया के बाहर एक उच्च विलेय सांद्रता बनाता है जिससे वे थोड़े पिलपिला हो जाते हैं, जिससे उन्हें आसानी से पच जाता है। ईडीटीए और ट्रिस-एचसीएल फ़ंक्शन जैसा कि पहले ही वर्णित है, जबकि आरएनएएस सेल के अंदर किसी भी आरएनए को रास्ते से हटाने के लिए चबाएगा। दूसरा समाधान वास्तव में कोशिकाओं को lyses करता है। इसमें एसडीएस डिटर्जेंट और NaOH होता है, जो पीएच को 12 या उससे अधिक तक बढ़ाता है, कोशिका के अंदर प्रोटीन को विकृत करता है और डीएनए को एकल स्ट्रैंड में अलग करता है। तीसरे समाधान में पीएच को अधिक तटस्थ स्तर पर बहाल करने के लिए पोटेशियम एसीटेट होता है ताकि प्लास्मिड डीएनए स्ट्रैंड एक साथ वापस आ सकें। इस बीच, विकृत प्रोटीन आपस में टकराते हैं और अवक्षेपित होते हैं, जबकि डोडेसिल-सल्फेट आयन आते हैं। पोटेशियम आयनों के साथ मिलकर एक अघुलनशील यौगिक बनाता है, जो घोल से भी निकलता है।