Les scientifiques et les techniciens ont souvent besoin de calculer la concentration de cellules dans une suspension. Par exemple, lorsqu'un patient se fait prélever du sang dans un cabinet médical, le laboratoire peut utiliser certaines méthodes pour rechercher la quantité de globules blancs dans un volume de sang donné. Cela donne au médecin beaucoup d'informations sur la santé de son patient, en particulier son système immunitaire et s'il combat une infection ou une autre maladie. Des tests comme celui-ci peuvent rechercher de nombreuses autres cellules dans le sang ainsi que dans le liquide céphalo-rachidien et d'autres fluides corporels, tels que le nombre de spermatozoïdes dans le sperme à des fins de fertilité. Les scientifiques calculent également les concentrations cellulaires de bactéries, levures et autres micro-organismes à de nombreuses fins allant de la recherche écologique aux technologies industrielles. L'une des techniques les plus courantes est également enseignée dans de nombreux cours de biologie au collège et utilise un appareil appelé chambre de comptage.
Avant que la suspension cellulaire puisse entrer dans la chambre de comptage, elle peut avoir besoin d'être diluée car elle peut contenir des milliers ou des millions de cellules. Dans ce cas, les cellules ne peuvent pas raisonnablement être comptées. Pour diluer l'échantillon, utilisez une pipette stérile pour placer dix microlitres de la solution cellulaire dans un tube à essai contenant 90 microlitres d'un diluant. Le type de diluant dépendra du type de cellule. Mélangez bien. Cette solution est maintenant dix fois plus diluée que l'échantillon initial, son facteur de dilution est donc de 10-1. Étiquetez-le. Répétez cette opération plusieurs fois, en utilisant une pipette stérile à chaque fois, jusqu'à ce que la solution soit suffisamment diluée. Si vous le diluiez une deuxième fois, le deuxième tube à essai était 100 fois plus dilué que la solution initiale, donc le facteur de dilution était de 10-2 etc.
Vous devrez peut-être essayer plusieurs dilutions pour déterminer le bon facteur de dilution pour la chambre de comptage. Une chambre de comptage est essentiellement une très petite boîte rectangulaire claire avec une profondeur précise et une grille précise inscrite sur le dessus. Il est également connu comme un hémocytomètre, ou parfois un hématimètre. L'objectif est que la suspension soit suffisamment diluée pour que, lorsqu'elle est vue dans la chambre de comptage, aucune cellule ne se chevauche et qu'elles soient réparties de manière uniforme sur toute la grille. Pipeter la suspension diluée contenant les cellules dans le puits de la chambre de comptage, où elle se déposera dans la chambre à grille par capillarité. Placez la chambre de comptage sur la platine du microscope et visualisez-la à faible puissance.
La grille contient des carrés qui sont constitués de carrés encore plus petits. Sélectionnez environ quatre ou cinq carrés, ou le nombre dont vous avez besoin pour compter au moins 100 cellules, selon un motif de votre choix, comme les quatre coins et un carré central. Si les cellules sont grandes, il peut s'agir de grands carrés, mais si les cellules sont petites, vous pouvez choisir les petits carrés à la place.
Le volume spécifique de chaque carré de la grille peut varier selon le fabricant de la chambre de comptage, mais souvent, la profondeur de la chambre est de 0,1 millimètres, l'aire des grands carrés est de 1 millimètre carré et l'aire des petits carrés est de 0,04 carré millimètres. Les plus grands carrés ont donc un volume de 0,1 millimètre cube. Pour cet exemple, supposons que vous ayez compté un total de 103 cellules dans cinq carrés et que vous ayez dilué l'échantillon initial jusqu'à ce que le facteur de dilution soit de 10.-2.
Si chaque carré de la grille a un volume de 0,1 millimètre cube et que cinq ont été comptés, alors le volume total de la chambre qui a été compté était de 0,5 millimètre cube et il y avait 103 cellules. Doubler pour en faire 1 millimètre cube en ferait 206 cellules. Un centimètre cube équivaut à 1 millilitre, ce qui est une mesure utile pour les liquides. Il y a 1 000 millimètres cubes dans un centimètre cube. Par conséquent, s'il y avait eu un centimètre cube, ou un millilitre, de suspension, vous auriez compté 206 000 (206 x 1 000) cellules. Voici à quoi cela ressemble comme équation :
Volume du carré de la grille × nombre de carrés comptés = volume total de suspension compté
Nombre de cellules ÷ volume de suspension compté = nombre de cellules par millimètre cube
Nombre de cellules par millimètres cubes × 1000 = nombre de cellules par millilitre
Vous devrez tenir compte de toute dilution effectuée pour que la solution initiale puisse être comptabilisée au microscope. Dans cet exemple, le facteur de dilution est de 10-2. Pour calculer la concentration initiale de la solution :
Nombre de cellules par millilitre ÷ facteur de dilution = concentration cellulaire
Pour cet exemple, le nombre de cellules par millilitre est de 206 000, et en le divisant par 10-2 (0,01) donne une concentration cellulaire de 20 600 000 cellules par millilitre dans l'échantillon initial.