Le tris, ou tris (hydroxyméthyl) aminométhane, est un tampon biologique courant, utilisé tout au long du processus d'extraction de l'ADN. Lors de l'extraction à partir de n'importe quel nombre de sources, l'ADN est sensible au pH. Pendant la lyse cellulaire, l'élimination des composants cellulaires indésirables et la précipitation, le tris est utilisé pour maintenir un pH stable. De plus, il joue un rôle particulièrement important dans la lyse cellulaire.
TL; DR (trop long; n'a pas lu)
L'extraction d'ADN est un processus sensible au pH, et l'utilisation d'un tampon tris aide à maintenir le pH stable pendant la lyse et l'extraction cellulaires.
Tris comme tampon
Comme le pH peut influencer et être influencé par un certain nombre de facteurs cellulaires, le maintien d'un pH stable est essentiel pour la science expérimentale. Les tampons biologiques, comme le tris, sont importants car ils peuvent maintenir un pH stable malgré des influences qui pourraient autrement modifier le pH. Le tris (hydroxyméthyl) aminométhane, avec un pKa de 8,1, est un tampon efficace entre pH 7 et 9. En raison de sa plage neutre, le tris est un tampon couramment utilisé dans les laboratoires biologiques. Cependant, le tampon tris est sensible à la température et doit être utilisé à la température à laquelle il a été initialement pH pour éviter les imprécisions.
Lyse de cellules
La lyse, ou la rupture des cellules, est la première étape de l'extraction de l'ADN. Ceci est accompli par un tampon contenant du tris et de l'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique). L'EDTA lie les cations divalents tels que le calcium et le magnésium. Puisque ces ions aident à maintenir l'intégrité de la membrane cellulaire, les éliminer avec l'EDTA déstabilise la membrane. Tris est le principal composant tampon; son rôle principal est de maintenir le pH du tampon à un point stable, généralement 8,0. De plus, tris interagit probablement avec le LPS (lipopolysaccharide) dans la membrane, servant à déstabiliser la membrane plus loin.
Tris protège l'ADN des changements de pH
Lorsque les cellules sont séparées, leur ADN et leur contenu se répandent dans le tampon. De plus, la RNase A (détruit l'ARN), les protéases (détruit les protéines) et le SDS (dodécyl sulfate de sodium, solubilise les fragments membranaires) sont souvent inclus. Pris ensemble, cette soupe de contenu cellulaire et d'ARN et de protéines fragmentés peut avoir un impact important sur le pH de la solution. Parce que l'ADN est sensible au pH, il est important que le tris tamponne la soupe et maintienne le pH à un point stable.
Précipitation d'ADN
Dans la dernière étape de l'extraction de l'ADN, l'ADN lui-même est extrait de la solution. À ce stade, l'ADN est soluble dans le tampon. Pour extraire de la solution, l'ADN est rendu insoluble en ajoutant de l'éthanol ou de l'isopropanol (alcool isopropylique). Lorsque cela est fait, l'ADN devient évident en solution sous la forme d'une substance filiforme blanche. Bien que l'ADN puisse être isolé des composants cellulaires restants de cette manière, il n'est pas "utilisable" lorsqu'il est insoluble. Après l'isolement, l'alcool est éliminé et l'ADN doit être renvoyé dans un tampon biologique, comme le tris, pour être utilisé.
Fais le toi-même
Bien que l'extraction de l'ADN soit couramment effectuée dans les laboratoires de recherche en utilisant généralement l'un des nombreux kits disponibles dans le commerce, n'importe qui peut faire une extraction d'ADN à la maison en utilisant des articles ménagers courants et du vert petits pois ou épinards. Dans ce cas, le tris, ni aucun tampon biologique, n'est présent pour protéger l'ADN des variations de pH. Cependant, c'est un moyen visuel d'aider les élèves à se connecter avec l'ADN cellulaire.