Votre professeur vous remet un échantillon de bactéries et vous demande: Combien de micro-organismes viables y a-t-il dans cet échantillon? Qu'est-ce que cela signifie et comment le comprendre? Une méthode consiste à trouver le nombre de des unités formant des colonies(UFC).
Que sont les UFC ?
Les UFC font référence au nombre de colonies individuelles de tout micro-organisme qui se développent sur une plaque de support. Cette valeur représente à son tour le nombre de bactéries capables de se répliquer car elles ont formé des colonies sur la plaque. Il existe une formule CFU qui implique l'échantillonnage.
Comment trouvez-vous CFU?
Il est très difficile de compter le nombre de bactéries dans un échantillon liquide. Il y en a trop et ils sont trop petits. De plus, certains d'entre eux peuvent être morts et d'autres vivants, et les morts ne devraient pas être pris en compte dans le total. Vous ne vous intéressez qu'à viable bactéries ou bactéries capables de se répliquer. Alors comment savoir combien de bactéries vous avez ?
De la même manière que vous pouvez effectuer un sondage auprès de 1 000 personnes et l'appliquer à 10 000 personnes pour déterminer comment elles pourraient penser à un certain sujet. Vous pouvez essayer de prélever une petite partie de votre échantillon d'origine, déterminer combien de bactéries il y a dans cette partie, puis calculez pour estimer combien il aurait pu y en avoir dans l'original goûter.
Utiliser des dilutions pour trouver des UFC
La procédure pour trouver les UFC d'un échantillon donné consiste d'abord à diluer cet échantillon. Les dilutions sont ensuite étalées sur des plaques avec le milieu de croissance approprié. Les dilutions multiples sont souvent une bonne idée car l'échantillon d'origine peut être très concentré.
Après avoir laissé les bactéries se développer sur les plaques pendant un laps de temps donné, colonies individuelles sont comptés sur une assiette. Si l'échantillon était trop concentré, alors au lieu de colonies individuelles, vous verrez une grande zone couverte de croissance bactérienne qui s'appelle un pelouse. Cela signifie que vous devez diluer davantage votre échantillon et essayer à nouveau de cultiver afin de pouvoir voir les colonies individuelles.
Comme les colonies individuelles proviennent d'une seule bactérie qui s'est répliquée plusieurs fois, seules celles-ci comptent pour le CFU.
Procédure expérimentale pour trouver des UFC
Un exemple d'utilisation de dilutions pour faire un calcul d'UFC pourrait être le suivant: d'abord, à partir de l'échantillon initial que votre professeur vous donne, vous prenez 1 ml et vous l'étalez. Le lendemain, vous voyez qu'il y a une pelouse de bactéries. Cela signifie que vous ne pouvez pas compter le nombre de CFU. La prochaine étape consiste à faire quelques dilutions.
Tout d'abord, vous prenez 1 ml d'échantillon et le diluez dans 9 ml de milieu liquide. Étant donné que la dilution correspond à une partie d'échantillon pour neuf parties de diluant, on parle de dilution 1:10. Ensuite, vous prenez 1 ml de la dilution 1:10 et l'ajoutez à 9 ml de milieu liquide. Cette dilution est une dilution 1:100. Enfin, vous faites une dilution 1:1000 en prenant 1 ml de la dilution 1:100 et en ajoutant 9 ml de milieu liquide. Pour chaque dilution, vous disposez maintenant de 10 mL de culture bactérienne diluée.
Dilutions effectuées, vous étalez 0,5 ml des dilutions sur des plaques. Assurez-vous d'étiqueter les plaques avec lesquelles la dilution a été plaquée.
Le lendemain, vous revenez et constatez que toutes les plaques contiennent des colonies individuelles. Vous voulez choisir une assiette entre 30 et 300 colonies. Vous voyez que la plaque de dilution 1:1000 contient environ 10 colonies, ce qui signifie que vous avez trop dilué l'échantillon. Cette plaque ne va pas être utile pour trouver CFU.
La plaque de dilution 1:10 a de nombreuses colonies, peut-être plus de 300. Dans ce cas, vous pouvez aller sur la plaque 1:100. Vous comptez les colonies sur cette plaque et constatez qu'elle compte 179 colonies. Cela signifie que 0,5 ml de la dilution 1:100 contient 179 UFC. Mais qu'en est-il de l'échantillon original?
Qu'est-ce que le calcul CFU ?
Maintenant que vous avez quelques données, vous pouvez effectuer le calcul CFU dans l'échantillon d'origine.
1. Prenez la quantité que vous avez plaquée (0,5 ml) et multipliez par le facteur de dilution (0,01) pour obtenir 0,005. Vous devez le faire pour trouver le facteur de dilution qui a donné votre nombre d'UFC. Ici, un demi-millilitre de la dilution 1:100 vous a permis de compter les UFC.
2. Divisez les UFC de la dilution (179) par le résultat de l'étape 1 (0,005) pour obtenir 35 800 UFC.
Cela signifie que le 1 ml d'échantillon d'origine qui a été dilué contient 35 800 UFC. Une autre façon de dire cela est de dire que l'échantillon d'origine a 35 800 UFC/mL.
CFU est un excellent outil pour trouver combien de bactéries, de champignons ou de micro-organismes il y a dans un échantillon donné. La méthode de placage décrite ici est particulièrement utile pour les échantillons très concentrés ou les organismes qui ne se développent pas bien en culture liquide.