Les bactéries sont cultivées dans des boîtes de Pétri sur un milieu solide appelé gélose bactérienne, où se forment des colonies circulaires surélevées. Contrairement à une cellule bactérienne individuelle, une colonie est un groupe de bactéries suffisamment grand pour être visible à l'œil nu. La croissance bactérienne peut être mesurée par une simple observation du nombre de colonies présentes; cependant, des méthodes plus quantitatives incluent l'utilisation d'une chambre de comptage, ou plus souvent, des comptages sur plaques viables. Ce dernier est utilisé le plus fréquemment car il fournit également des informations qualitatives telles que l'effet de conditions de croissance variables. Puisqu'il peut y avoir des milliards de bactéries dans une boîte de Pétri, la mesure nécessite d'abord de diluer l'échantillon pour pouvoir compter le nombre de colonies.
Dans un tube à essai, ajouter 10 microlitres de la culture bactérienne de départ à 90 microlitres de milieu de dilution. Fermer hermétiquement le couvercle du tube et vortexer doucement pour obtenir un mélange homogène. Maintenant, l'échantillon est un dixième de sa concentration d'origine.
Transférer 10 microlitres de ce nouvel échantillon dans un nouveau tube à essai contenant 90 microlitres de milieu de dilution, mélanger à nouveau. Encore une fois, le résultat sera l'échantillon encore plus dilué - il sera maintenant au centième de sa concentration d'origine. Répétez cette opération plusieurs fois, jusqu'à ce que l'échantillon original ait été dilué entre 104 et 1010 fois. Assurez-vous que chaque tube est étiqueté avec la dilution correcte, par exemple 10-1, 10-2 etc.
Déposer 10 microlitres de la dernière dilution complétée sur la plaque de gélose. À l'aide du bord d'étalement, répartissez la solution bactérienne sur toute la surface de la plaque de gélose. Répétez cette opération pour deux autres assiettes. Il est également courant d'effectuer ces étapes avec d'autres niveaux de dilution à des fins de comparaison. Assurez-vous d'étiqueter le fond des assiettes. Remettez les couvercles sur chaque plaque et laissez sécher les plaques de gélose pendant plusieurs minutes soit sur une paillasse de laboratoire sous une flamme, soit dans un incubateur. Placer les plaques dans l'incubateur qui doit être réglé à la température appropriée pour la souche de bactéries. Laisser pousser 12 à 16 heures.
Les colonies doivent être visibles après 16 heures; cependant, certaines modifications génétiques peuvent nécessiter plus de temps (par exemple, le développement de la couleur). Lorsque des colonies sont observables, retirez les plaques et trouvez celles qui ont entre 30 et 300 colonies. À l'aide d'un marqueur permanent, placez un point au fond de la boîte de Pétri - le côté avec la gélose, pas le couvercle - partout où une colonie est visible à travers la gélose. Comptez chaque point du marqueur. Répétez l'opération pour chaque plat.
Pour mesurer la quantité de bactéries dans la culture de départ pour cette expérience, la dilution doit être inversée dans les calculs, à deux endroits. Premièrement, lorsque vous avez pris un microlitre du tube à essai pour le mettre dans la boîte de Pétri, vous avez pris un dixième de l'échantillon dilué, vous devez donc tout multiplier par 10 pour inverser cela. De plus, si le facteur de dilution dans le tube à essai était, par exemple, de 10-7, alors le nombre de colonies doit être multiplié par 107 afin d'inverser l'effet de dilution. Supprimez simplement le signe négatif de l'exposant dans les calculs. Utilisez la formule :
[Nombre de colonies comptées] × 10 × [combien de fois l'échantillon doit être multiplié pour atteindre la concentration d'origine: par exemple, 105] = Nombre d'unités formant colonie (UFC) par millilitre de culture de départ. C'est la croissance bactérienne dans vos boîtes de Pétri.