Tracer un graphique de la concentration du produit en fonction du temps pour les données du premier tube à essai du test enzymatique. Remarque: l'axe horizontal doit être le « temps » et l'axe vertical doit être la « concentration du produit ».
Calculez la droite de régression linéaire pour les points de données que vous avez tracés dans la section 1, étape 1. Alors qu'Excel et les calculatrices graphiques peuvent facilement déterminer ce modèle linéaire, vous pouvez dériver une estimation de la régression la pente de la ligne en divisant la différence de concentration de produit entre des points de données adjacents par leur différence dans le temps.
Enregistrez la pente de la droite de régression linéaire de la section 1, étape 2 comme « vitesse de réaction initiale (Vo) ». Remarque: dans le modèle de droite de régression « [concentration du produit] = m [temps] + b », le coefficient « m » est le pente.
Répétez les étapes 1, 2 et 3 pour le reste des tubes à essai du test.
Tracez l'inverse de la concentration de substrat pour chaque tube à essai par rapport à l'inverse de sa vitesse de réaction initiale (de la section 1, étape 4). Par exemple, si la vitesse initiale d'un tube à essai avec une concentration initiale de substrat de 50 micromolaires (uM) était de 80 uM/s, les inverses seraient 1/50 uM pour la concentration en substrat et 1/80 uM/s pour la première rapidité. Remarque: la concentration de substrat inverse doit être sur l'axe horizontal et la vitesse initiale inverse doit être sur l'axe vertical.
Remarque: la concentration du substrat doit être sur l'axe horizontal et la vitesse de réaction initiale doit être sur l'axe vertical.
Déterminez la droite de régression linéaire du graphique que vous avez tracé à la section 2, étape 1. Remarque: comme vous aurez besoin de connaître l'intersection en y de la droite de régression, vous devez saisir les points à partir de Section 2, étape 1 dans Excel ou une calculatrice graphique et utilisez la modélisation de régression intégrée Fonctionnalité.
Divisez 1 par l'intersection y de la droite de régression linéaire. Cela vous donnera la valeur de l'inverse de Vmax, la vitesse de réaction maximale pour l'enzyme. Remarque: si le modèle de régression linéaire prend la forme « [Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + b », alors la valeur de « b » serait l'intersection y. Divisez 1 par "b" pour calculer l'inverse de Vmax.
Divisez 1 par le résultat de la section 2, étape 3 pour calculer la valeur réelle de Vmax.
Déterminer la concentration de l'enzyme dans le test d'origine (voir les données brutes). Remarque: la concentration en enzyme est la même pour tous les tubes à essai; seules les concentrations de substrat varient dans le dosage.
Divisez la Vmax (de la section 2, étape 4) par la concentration en enzyme (de la section 2, étape 5). Le résultat est la valeur de Kcat.
Rédacteur publicitaire basé à Chicago, Andy Pasquesi possède une vaste expérience en rédaction pour l'automobile (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), les services financiers (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), les clients de la santé (Abbott) et des biens de consommation (Sony, Motorola, Knoll). Il détient un baccalauréat ès arts en anglais de l'Université Harvard mais ne se soucie pas de la virgule d'Oxford.