Geelielektroforeesin lukeminen

Geelielektroforeesi on menetelmä, jota laboratorioissa käytetään erottamiseen DNA (deoksiribonukleiinihappo). Sitä voidaan käyttää myös RNA: n ja proteiinien erottamiseen.

Geelielektroforeesitulosten lukeminen antaa tutkijoille mahdollisuuden määrittää näytteessä olevien säikeiden koko. Prosessin toiminnan ymmärtämiseksi on ensin opittava geelielektroforeesimääritys.

Geelielektroforeesi on tehokas työkalu, jota käytetään molekyylibiologia määrittää DNA: n, RNA: n ja proteiinien koko ja sähkövaraus. Aloitat käyttämällä DNA-kappaleita, joita entsyymit pilkkovat suuremmasta DNA-juosteesta.

Käyttämällä tuloksena geelielektroforeesikaistan voimakkuutta voit selvittää fragmenttien koko. Sitten voidaan saada a DNA-sormenjälki.

Kuten sanan ”elektro” osa paljastaa, a geelielektroforeesin määritelmä edellyttää sähkökentän käyttöä. Käytetään erityistä konetta, joka sisältää puskuriliuoksen, joka peittää elektrodit, kuopan geelin suspendoitumiseen sisälle ja itse elektrodit.

Geelielektroforeesi vaatii sellaisen geelin käyttöä, joka on muodostettu laataksi, joka on tyypillisesti valmistettu merilevästä peräisin olevan agarin puhdistetusta versiosta, jota kutsutaan agaroosiksi.

Agaroosigeelit tehdä huokoinen matriisi, jonka läpi erikokoiset varatut molekyylit voivat kulkea eri nopeuksilla. Kemikaali nimeltä etidiumbromidi (EtBr) lisätään geeliliuokseen ennen sen kaatamista muottiin.

Jos sinulla on hyvin pieniä DNA- tai proteiinimolekyylejä erotettavissa, sinun on ehkä käytettävä a polyakryyliamidigeeli agaroosin sijaan. Ota huomioon, kun käytät polyakryyliamidia, sillä se on neurotoksinen.

Erityinen kampa asetetaan agaroosigeelimuottiin ja poistetaan sitten varovasti jähmettymisen jälkeen. Täältä sijoitetaan DNA-fragmentti tai muut molekyylinäytteet, jotka on ensin sekoitettu erityisen kuormausvärin kanssa. lastausväri on vain seurata DNA: n liikettä, koska se ei ole toisin näkyvissä.

On myös kaivo, joka sisältää niin sanotun a DNA-tikkaat tai merkki. Tämä toimii korkealaatuisena templaattina, jolla on tunnetut kaistakoot, kokojen vertaamiseksi tutkittaviin DNA-näytteisiin. Kun sähkökenttä on syötetty, nämä negatiivisesti varautuneet molekyylit kulkevat geelin läpi kohti positiivista päätä.

Kun molekyylit ovat kulkeneet geelin loppuun, on aika lukea geelielektroforeesin tulokset. Geelissä oleva EtBr-väriaine sitoutuu DNA: han helposti, joten sen käyttö on, ja sitten voit nähdä DNA-nauhat fluoresoivana UV-valossa.

Sinun on oltava varovainen, ettet kosketa etidiumbromidia, koska sen affiniteetti DNA: ta kohtaan tarkoittaa myös sitä, että se voi purkaa sen; siksi sitä pidetään mutageenina. Uudempia, turvallisempia väriaineita on nyt saatavana, vaikka niiden hintapisteet ovat korkeammat.

UV-valo paljastaa DNA: n tai muiden molekyylinäytteiden geelielektroforeesikaistan voimakkuuden. Nauhojen sijainti geelillä paljastaa DNA-fragmentti. geelielektroforeesinauhan voimakkuus paljastaa molekyylin pitoisuuden.

Nyt voit verrata näytteidesi DNA-juovia DNA-tikkaiden näytteeseen. Tikkaiden tunnetut kaistakoot auttavat määrittämään tutkittavan DNA: n suhteellisen koon.

Geelielektroforeesia on käytetty DNA-sormenjälkien ottaminen ja rikostekniset palvelut. Se on auttanut tutkijoita määrittämään tietoja monien lajien genomeista. Laadukkaiden geelielektroforeesien käyttäminen on välttämätöntä näille tärkeille aloille.

Siksi on erittäin tärkeää työskennellä korkealaatuisten ainesosien kanssa ja olla hyvin varovainen geelien valmistuksessa. On välttämätöntä estää DNA-näytteiden saastuminen RNA: lla tai proteiineilla.

Varmista, että käytät puhdasta puskuria, kaada geeli varovasti, jotta sen kammakuopat muodostuvat tasaisesti, ja pidä kaikki reagenssit oikeassa lämpötilassa. Geelielektroforeesi kaistan voimakkuuden tulee olla eloisa ja puhdas, eikä taustalla ole jälkiä muusta DNA: sta, eikä geeliä saastuttavia RNA: n tai proteiinien tahroja.