Tutkijat käyttävät virtaussytometriaa erottaakseen erityyppiset solut tai mikroskooppiset organismit. Se on työkalu, jota käytetään monissa sovelluksissa, kuten lääketieteellisessä diagnostiikassa tai oikeuslääketieteellisessä patologiassa. Vaikka tämä kokeellinen tekniikka on melko helppo toteuttaa, tuotettujen monimutkaisten tietojen analyysi virtaussytometrillä on vaikeampi useiden kokeellisten tekijöiden ja / tai sytometrin vuoksi parametrit. Sellaisenaan on rutiininomaista, että sytometriset tiedot visualisoidaan ja analysoidaan käyttämällä hienostuneita ammatillisia ohjelmia, kuten CELLQuest tai FlowJo. Virtaussytometriatekniikoiden, koneiden ja ohjelmistojen tuntemus on välttämätöntä näiden tulosten ymmärtämiseksi kokeita.
Selvitä kokeen tarkoitus kysymällä: "Mitä kysymystä tai hypoteesia tutkittiin?" Tämä tulee olemaan tarvitaan säätämään raakatulokset sopivaan muotoon ja asetuksiin jatkoanalyysiä varten käyttäen tilastollista sytometriaa ohjelmisto. Tee tarvittavat muutokset, jotta tiedot näytetään asianmukaisilla asetuksilla (esim. Positiiviset solut, negatiiviset portit, fluoresenssin voimakkuus, solupopulaatiot jne.).
Löydä portit. Solut voidaan ryhmitellä tai yksinkertaisesti tarkkailla klustereina tiheyskaaviossa tai ääriviivakaaviossa. Ryhmät erottuvat usein identiteetin mukaan. Jos yksi ryhmä tahraa erittäin voimakkaasti tietylle markkerille tai vasta-aineelle, päätellään, että kaikilla ryhmän jäsenillä on identiteetti tietylle solutyypille, joka ilmentää kyseistä markkeria. On tavallista löytää soluja, jotka ovat positiivisia useammalle kuin yhdelle näistä markkereista, ja nämä solut ovat yleensä välituotteita ja merkitty "kaksoispositiivisiksi".
Katso sirontakuvia. Tapa, jolla soluryhmät jakautuvat sirontakaavioon, on osoitus solujen koosta. Solut, joissa on hyvin suuria tai suuria sirontoja, ovat tyypillisesti suuria soluja; ne voivat kuitenkin olla suuria yksinkertaisesti siksi, että ne sisältävät suuren määrän sytoplasmaa, tai ne voivat olla korkeita, koska niillä on erittäin suuri ydin. Tutkittavasta biologiasta riippuen tämä vaihtelee tietysti suuresti kokeiden välillä.
Katso numeroita. Säädä käyrät näyttämään eri parametrit yhdellä akselilla (yleensä X-akselilla) pitäen lukemat Y-akselilla. Tämä osoittaa näytepopulaation osuuden, joka on positiivinen kyseiselle parametrille, kuten a piikki havaitaan normaalisti positiivisesti värjätyssä näytteessä, joka puuttuu negatiivisesta kontrollista näyte.
Katso useita parametreja sisältäviä histogrammeja. Säätämällä X-akseli ja Y-akseli edustavat jokaista erilaista parametria kokeilun aikana tutkittujen ominaisuuksien ymmärtäminen on mahdollista näytteen. Esimerkiksi asettamalla X-akselille punainen fluoresenssi ja Y-akselille vihreä fluoresenssi, kvadranttityyliset portit voidaan laskea näyte näyttää neljänneksen neljä aluetta, joissa solut ovat läsnä ja värjätty joko punaiselle tai vihreälle fluoresenssille, molemmat värit tai ei yhtään kaikki. Tämä mahdollistaa heterogeenisen näytteen jakamisen komponentteihin ja mahdollisten päällekkäisten entiteettien visualisoinnin ja kvantifioinnin.
Viitteet
- "Virtaussytometrian tietojen analysointi"; Susan Sharrow; 1991
- "Virtaussytometria: instrumentointi ja tietojen analysointi"; Marvin Van Dila; 1985
- ”Virtaussytometrian protokollat”; Teresa ja Robert Hawley; 2004
kirjailijasta
Palmer Owyoungilla on kansainvälisen liiketoiminnan maisteri Kalifornian yliopistossa San Diegossa ja Taiteiden kandidaatti sosiologiassa Kalifornian yliopistossa Santa Barbarassa ja on koulutettu molekyyli biologi. Hän on ollut freelance-kirjailija vuodesta 2006. Kirjoittamisen lisäksi hän on kokopäiväinen Forex-kauppias ja Internet-markkinoija.
Valokuvahyvitykset
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images