Nestemäistä ravintoliemiä käytetään bakteerien, kuten Escherichia coli, viljelyyn. Tämän liemen reseptit vaihtelevat bakteerilajin ja geneettisten modifikaatioiden, esim. Antibioottiresistenssin, läsnäolon mukaan. Liemi voidaan kiinteyttää lisäämällä agaria, mikä antaa bakteereille mahdollisuuden muodostaa erillisiä pesäkkeitä, kun taas nesteviljelmässä ne yksinkertaisesti leviävät koko tilavuuteen. Tämä on perustekniikka, mutta välttämätön tekniikka edistyneille menetelmille, kuten geenikloonaus tai mikrobiologiset määritykset. Tässä artikkelissa oletetaan, että tavanomaisia laboratorion Escherichia coli -kantoja on viljeltävä Luria-liemen (LB) agar-levyillä (tai petrimaljoilla).
Punnitaan 10 grammaa bakteerilaatuista tryptonia, 5 grammaa hiivauutetta, 5 grammaa natriumkloridia, 15 grammaa agaria tai agaroosia ja 1 millilitra 1 N natriumhydroksidia. Sekoita näitä tilavuuteen tislattua ja autoklaavoitua steriiliä vettä, kunnes saadaan 1 litra väliainetta. Autoklaavista väliaine löysästi suljetuissa pulloissa tai pulloissa 25 minuutin ajan. Anna jäähtyä noin 50 asteeseen, ennen kuin lisäät reagensseja, jotka tuhoutuvat korkeassa lämpötilassa, kuten antibiootteja tai muita ravintolisiä.
Anna autoklaavoidun väliaineen jäähtyä 50 asteeseen eikä alle 45 asteeseen, koska agar asettuu astiaan ennen kuin se voidaan kaataa. Hanki steriilejä petrimaljoja ja kaada tarpeeksi kattamaan koko levyn pinta-ala ja vähintään puolet sen syvyydestä. Vältä levyjen liikaa täyttämistä, äläkä anna agarin mieluiten koskettaa astian yläreunaa. Anna levyjen jähmettyä steriilissä ympäristössä (esim. Laminaarisen virtaushupun alla) jättämällä kannet irti hupun kulmasta.
Kuivaa levyt. Vaikka levyjä voidaan käyttää heti niiden asettamisen jälkeen, agarin pinnalla on jonkin verran kosteutta, mikä estää bakteeripesäkkeitä tarttumasta riittävästi. Siksi on parasta kuivata levyt ennen bakteerien levittämistä, esimerkiksi jättämällä ne istumaan huoneenlämpötilassa muutaman päivän tai puolen tunnin ajan laminaarisen virtaushupun alla tai 37 celsiusasteessa hautomo.
Säilytä levyt. Kuivatut levyt on pinottava ylösalaisin (ylösalaisin) kannelle ja palautettava alkuperäiseen pakattu, teipattu kiinni ja joko kääritty kalvoon valolta suojaamiseksi tai sopivaan astiaan. Kirjoita aina valmistuspäivä levylle ja vältä käyttöä, jos levyt ovat yli 2 kuukautta vanhoja.
Viitteet
- "Nykyiset protokollat molekyylibiologiassa"; Karen Elbing ja Roger Brent; 2002
Vinkkejä
- Suorita mahdollisimman monta yllä mainituista vaiheista (mieluiten kaikki) steriilissä ympäristössä (esim avotuli tai laminaarinen virtaushuppu) estämään ilmassa olevien bakteerien epäpuhtauksien pääsyn ja kasvun media.
kirjailijasta
Palmer Owyoungilla on kansainvälisen liiketoiminnan maisteri Kalifornian yliopistossa San Diegossa ja Taiteiden kandidaatti sosiologiassa Kalifornian yliopistossa Santa Barbarassa ja on koulutettu molekyyli biologi. Hän on ollut freelance-kirjailija vuodesta 2006. Kirjoittamisen lisäksi hän on kokopäiväinen Forex-kauppias ja Internet-markkinoija.
Valokuvahyvitykset
Jupiterimages / Comstock / Getty Images
