Yksi klassisista tavoista määrittää mikrobien pitoisuus näytteessä on laimentaa näyte, kasvattaa mikrobeja maljoilla ja laskea pesäkkeet. Päällystetyt mikrobit kasvavat yhdestä tai useammasta solusta koostuvasta pesäkkeen muodostavasta yksiköstä näkyväksi pesäkkeeksi, joka voidaan nähdä ja laskea. Bakteerit ovat yleisimpiä mikrobeja arvioitaessa levyjen lukumäärää. Pesäkkeiden lukumäärää käytetään maaperän, veden ja ruoan mikrobien havaitsemiseen ja laskemiseen. Pesäkkeiden laskemista koskevat protokollat korostavat tarkkaa ja metodista lähestymistapaa.
Näytteiden laimentaminen, maljaus ja inkubaatio
Jos vain voittaa mikrobinäytteen agar-levylle, näet niin paljon pesäkkeitä muodostavia yksiköitä, että yksittäiset pesäkkeet sekoittuvat yhteen, mikä tekee niistä mahdottomaksi laskea. Tämän ongelman ratkaisemiseksi sekoita näyte nestemäiseen väliaineeseen, ota pieni määrä sitä seosta ja laimenna se edelleen. Toista tämä prosessi kuusi - 10 kertaa. Levitä lopullinen laimennus agarlevylle ja inkuboi sitä neljästä seitsemään päivään, ennen kuin lasket pesäkkeet.
Manuaalinen laskenta
Ensisijainen temppeli pesäkkeiden laskemisessa on laskea kukin pesäkepiste kerran. Yksi lähestymistapa on asettaa Petri-malja ruudukon taustalle ja laskea pesäkkeet jokaisessa ruudukon solussa liikkumalla metodisella kuviolla kaikkien solujen läpi. Laskettujen pesäkkeiden merkitseminen Petri-astian takaosaan voi myös olla hyödyllinen lähestymistapa. Yleensä sinun on laskettava vähintään kolme levyä; Käytä vain 30-300 pesäkettä sisältäviä levyjä vankkojen johtopäätösten tekemiseen, ehdottaa laboratorioille ja valmistajille konsultointipalveluja tarjoava yritys Microbiology Network. Levyt, joiden pesäkkeitä on liian monta laskea tai joissa pesäkkeitä on liian vähän, on pinnoitettava uudesta laimennuksesta.
Automaattinen laskenta
Inhimillinen virhe lisää pesäkkeiden manuaaliseen laskemiseen kuluvaa aikaa. Paranna sekä tarkkuutta että tehokkuutta asettamalla Petri-astia automaattiseen pesäkkeiden laskentalaitteeseen. Automaattiset pesäkelaskurit ottavat kuvan astiasta, erottavat pesäkkeet taustasta ja laskevat sitten levyllä olevat pesäkkeet algoritmilla. Algoritmeilla voi olla vaikeuksia erottaa pesäkkeet, kun kaksi tai useampi pesäkettä koskettaa reunoja, joten tämä on jatkuvan ohjelmistokehityksen alue.
Laskennan tekeminen monimutkaisemmaksi
Mikrobitiheyden laskemisen tarkkuudella pesäkemääristä on joitain rajoituksia. Pesäkkeitä muodostavat yksiköt voivat olla yksi solu, soluketju tai koko solupaketti. Oletuksena on, että siirtomaa edustaa yhtä solua, joten pesäkemääristä lasketut pitoisuudet voivat olla pieniä. Eri mikrobit tarvitsevat erilaisia kasvuolosuhteita, ja levyllä olevat pesäkkeet edustavat vain niitä mikrobeja, jotka menestyvät tällä kasvualustalla noissa inkubaatio-olosuhteissa. Lisäksi pesäkkeiden laskemisessa ei rekisteröidä kuolleita soluja, mikä on tärkeä näkökohta, kun tarvitset solupitoisuutta alkuperäisessä näytteessä.
