Ohutkerroskromatografian aikana teknikko sijoittaa kemiallisen seoksen täplät tasaiselle levylle, joka on päällystetty imukykyisellä materiaalikerroksella, ja sitten levyn alaosa asetetaan liuottimeen. Kun liuotin liikkuu levyä ylöspäin, seoksessa olevat kemikaalit liikkuvat sen kanssa eri nopeuksilla, joten ne erottuvat. Tämä testi määrittää seoksessa olevat kemikaalit vertaamalla tuntemattomien matkustamisnopeuksia tunnettuihin standardeihin. Tuloksiin voivat kuitenkin vaikuttaa monet tekijät.
TL; DR (liian pitkä; Ei lukenut)
Retentitekijän arvoihin ohutkerroskromatografiassa vaikuttavat absorbentti, liuotin, itse kromatografialevy, levitystekniikka sekä liuottimen ja levyn lämpötila.
Säilytystekijät
Kemikaalin retentio- kerroin ohutkerroskromatografian aikana mittaa kuinka pitkälle se liikkuu levyä ylöspäin vasteena liuottimen liikkeelle. Koska kemikaalin absoluuttinen liike riippuu liuottimen kulkemisesta, lasketaan retentioasteiden arvot suhteessa liuottimen liikkumisasteeseen. Kemikaalin retentioaste on pystysuora etäisyys, jonka kemikaali siirtää paikasta, jossa se oli alunperin levylle levitettynä jaettuna liuottimen kulkemalla matkalla - mitattuna samasta aloituspisteestä kohta.
Ohutkerroskromatografialevy
Ohutkerroskromatografialevy itsessään voi vaikuttaa annetulle kemikaalille saatuun retentioarvoon. Ohutkerroskromatografialevyt voidaan päällystää useilla absorboivilla kiintoaineilla; useimmiten piidioksidi tai alumiinioksidi. Koska retentiokerroin perustuu kemikaalin suhteelliseen affiniteettiin absorbenttiin verrattuna liuottimeen, absorbentin vaihtaminen voi suuresti muuttaa retentio- tekijää. Myös imukykyisen kerroksen paksuus ja tasaisuus voivat vaihdella levystä toiseen, varsinkin jos ne ovat käsintehtyjä. Nämä tekijät voivat myös muuttaa kemikaalien retentioarvoarvoa.
Liuottimen vaikutusten säilytystekijät
Koska liuotin kuljettaa kemikaalia levylle, käytetyllä liuottimella on myös merkittävä vaikutus kemikaalin retentioarvoon. Liuotin, jolla on vahvempi vuorovaikutus tietyn kemikaalin kanssa, voittaa kaikki helpommin kemikaalin affiniteetti absorboivaan kerrokseen ja siirrä kemikaali kauemmaksi tietyllä ajanjaksolla aika. Liuottimien seoksilla voi myös olla erilaiset vaikutukset kunkin liuottimen osuudesta riippuen.
Muut tekijät
On olemassa muutamia muita tekijöitä, jotka voivat vaikuttaa retentio-tekijään joissakin tapauksissa. Liuottimen ja levyn lämpötila voi tehdä pieniä muutoksia, koska esimerkiksi liuotin pystyy usein paremmin liuottamaan kuljettamansa kemikaalit korkeammissa lämpötiloissa. Teknikon tekniikka näytteen levittämiseksi levylle voi myös muuttaa retentio- tekijää. Liian suuren näytteen lisääminen voi johtaa siihen, että levylle siirtyy suuria, hajanaista kemikaaliauhaa, mikä vaikeuttaa kemikaalin kuljettaman etäisyyden tarkkaa mittaamista.
