Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) on laboratoriotekniikka, jota käytetään yhdisteiden erottamiseen ja tunnistamiseen. Se on eräänlainen pylväskromatografia, joka perustuu erilaisten yhdisteiden polaarisuuteen liuoksessa. HPLC eroaa tavallisesta pylväskromatografiasta, koska se käyttää painetta pakottaakseen liuoksen nopeammin pylvään läpi ja tuottaa siten nopeammat ja joskus tarkemmat tulokset. Tavoitteena on erottaa yhdisteet sarakkeesta ja saada ne poistumaan erikseen.
HPLC: n nopeuden ja sen riippuvuuden vuoksi yhdisteiden erilaisista polariteeteista kaksi yhdistettä, joissa on samanlainen rakenne ja polariteetit voivat poistua kromatografialaitteesta samanaikaisesti tai melkein samalla tavalla aika. Tätä kutsutaan koeluutioon. Koeluutio tekee vaikeaksi määrittää missä vaiheessa seos eluoituu.
HPLC käyttää tyypillisesti lasipylvästä, joka on täytetty eri materiaaleista valmistetuilla helmillä. Pylvään läpi pakotetuissa seoksissa on kemikaaleja, jotka sitoutuvat eri vahvuuksilla helmiin. Sitoutumisen vahvuus, joka riippuu napaisuuden samankaltaisuudesta, määrää kuinka kauan kemikaali sitoutuu helmiin ennen vapauttamista. Jotkut yhdisteet sitoutuvat niin voimakkaasti, että niitä ei käytännössä koskaan vapautu pylvään helmistä, eikä niitä mitata koskaan pylväästä poistuvassa liuoksessa.
Tyypillisiin laboratorioerotustekniikoihin kuuluu määrityksen tai erotusmenetelmän kehittäminen ja sitten tämän määrityksen toteuttaminen yksittäisten yhdisteiden erottamiseksi liuoksesta. Tämä johtaa kuitenkin yleensä useisiin ratkaisuihin, joille on myös suoritettava menettelyjä, mikä johtaa monimutkaisuuden eksponentiaaliseen lisääntymiseen. Vaikka HPLC voi usein yksinkertaistaa ja nopeuttaa tätä prosessia, HPLC-laitteen kehittämiskustannuksista voi tulla valtava. Vaikka HPLC-laitteen kehittäminen onkin paljon tehokkaampaa, se on paljon kalliimpaa kuin muiden määritysten kehittäminen yhdisteiden erottamiseksi. Tämän vuoksi se ei ole taloudellisesti kannattava monille pienille yksityisomistuksessa oleville laboratorioille.
HPLC: tä ei käytetä vain yksinkertaisten yhdisteiden erottamiseen, vaan sitä käytetään myös eristämään spesifiset proteiinit soluseoksesta. Tässä tapauksessa kolonnin helmet on yleensä päällystetty kerättävälle proteiinille spesifisellä vasta-aineella. Proteiinit sitovat vasta-aineita ja jäljellä oleva liuos johdetaan pylvään läpi, sitten proteiinit vapautetaan toista liuosta käyttäen ja kerätään. Tämä vaatii erittäin ammattitaitoisen teknikon valvomaan pylvästä koko ajan ja varmistamaan, että prosessi sujuu täsmälleen suunnitellusti.