Kun testaat pH: n vaikutusta entsyymiaktiivisuuteen, sinun on vaihdettava pH: ta. Voit kuitenkin tehdä tämän hyvillä tai huonoilla tavoilla. Muista, mitkä ylimääräiset tekijät voivat sekoittaa pH-arvon vaihtelun. Muuten saadut tulokset eivät välttämättä johdu pH: n muutoksesta, vaan jostain muusta tekijästä. Tietäen kuinka muuttaa pH-arvoa oikein ja mitkä tekijät sekoittavat kokeen pH-arvon, voit saada hyviä tuloksia ja ymmärtää, miksi tulokset eivät välttämättä ole juuri sitä, mitä odotit.
Muuta vain yksi asia
Testattaessa pH: n vaikutusta entsyymiaktiivisuuteen, muuta vain pH: ta pitäen muut tekijät vakiona. Näitä muita tekijöitä ovat entsyymikonsentraatio, substraattikonsentraatio ja lämpötila. Vakiona pysyviä tekijöitä kutsutaan kontrollimuuttujiksi. Kontrollimuuttujien avulla voit päätellä, että kokeessa saadut tulokset entsyymiaktiivisuudesta johtuvat pH: n vaihtelusta, riippumattomasta muuttujasta. Tieto siitä, mitä tekijöitä ei pidä muuttaa kokeessa, on yhtä tärkeää kuin tietää, mitä tekijää voidaan muuttaa, muuten on vaikea päätellä, johtuvatko tulokset todella yhdestä asiasta testattu.
Valitse yksi happo tai yksi emäs
Liuoksen pH voidaan muuttaa liuottamalla erilaiset määrät happoa tai emästä veteen. Yksi tapa testata pH: n vaikutus entsyymiaktiivisuuteen on lisätä vähitellen tippoja vahvaa happoa tai vahvaa emästä liuokseen, joka sisältää entsyymin, ja tarkkaile sitten kohtaa, jossa entsyymiaktiivisuus hidastuu tai pysähtyy. Happo määritellään yhdisteeksi, joka luovuttaa vetyionia, nimeltään protoni (H +), ja emäs määritellään yhdisteeksi, joka luovuttaa hydroksidi-ionia (-OH). Eri hapoilla ja emäksillä on erilainen määrä protoneja tai hydroksidi-ioneja luovuttamiseksi. Kaikkia protoneja tai hydroksidi-ioneja ei luovuteta heti, kun happoa tai emästä lisätään liuokseen, mutta luovutettujen protonien tai hydroksidi-ionien määrä muuttaa pH: ta eri nopeuksilla. Siksi on hyvä muuttaa pH: ta entsyymikokeessa käyttämällä vain yhtä happotyyppiä tai yhtä emästyyppiä. Muuten muut muuttujat lisätään tahattomasti.
Kudokset muuttavat myös pH: ta
Jotkut entsyymiaktiivisuutta tutkivat laboratoriotutkimukset käsittävät tuoreen kudoksen jauhamisen entsyymien vapauttamiseksi soluista ja substraatin lisäämisen entsyymiaktiivisuuden mittaamiseksi. Tuore kudos sisältää verta. Koska veressä on entsyymejä, jotka muuttavat veressä liuenneen hiilidioksidikaasun hiilihapoksi, kudos itse voi vaikuttaa pH-arvoon. Siksi kokeissa, joihin liittyy entsyymiaktiivisuutta tuoreessa kudoksessa, on hyödyllistä pestä veri dekantterilasissa kylmää vettä ennen kudoksen jauhamista. Tämä minimoi kudoksesta johtuvan tahattoman pH-muutoksen, jotta voidaan tutkia tarkoituksellinen pH-muutos.
Pidä koot samoina
Kuten edellä keskusteltiin, entsyymikonsentraatio on kontrollitekijä, jota ei pidä muuttaa testattaessa pH: n vaikutusta entsyymiaktiivisuuteen. Koemenetelmät vaihtelevat kuitenkin luonnostaan entsyymikonsentraatiota hienovaraisella tavalla. Jos käytetään puhdasta entsyymiliuosta, pidetään entsyymipitoisuus vakiona. Kuitenkin kokeissa, joissa entsyymi on peräisin tuoreesta kudoksesta, kuten perunanpaloista, kasvipaloista tai maksanpaloista, palojen koko muuttaa entsyymimäärää kussakin koeputkessa. Siksi on hyödyllistä leikata kudospalat mahdollisimman tasaisesti. Tämä on toinen esimerkki siitä, kuinka tieto siitä, mitä ei pidä muuttaa, ja miksi on vaikea olla välttämättä muutosta kokonaan, auttaa tulkitsemaan pH: n kaltaisen tekijän tuloksia.