Korkean suorituskyvyn nestekromatografia on tekniikka seoksen laboratorioanalyysiä varten. Se on tehokas kromatografiatyyppi, joka käyttää suurta painetta eikä pelkästään painovoimaa seoksen näytteen työntämiseksi pylvään läpi. Näyte ruiskutetaan, sitten suuria määriä painetta sisältävä pumppu auttaa näytteen siirtämistä pakattua pylvästä pitkin, jossa se erotetaan yksittäisiksi komponenteiksi. Tämä erotus analysoidaan sitten detektorilla tulosten tuottamiseksi.
Injektiokohta
Jotta näyte voidaan injektoida HPLC: hen, näyte on ensin liuotettava napaiseen nestemäiseen liuottimeen, edullisesti sellaiseen, jolla on tunnetut HPLC-spektrit, jotta sen tiedot voidaan erottaa näytteestä. Näytteen sisältävä nestemäinen liuos laitetaan instrumenttiin ja lähetetään kolonniin. Injektiokohdan todellinen sijainti riippuu instrumenttien merkistä. Useimmissa tapauksissa injektioprosessi on automatisoitu, mutta joissakin tapauksissa laboratoriotyöntekijän on pistettävä näyte pienellä ruiskuneulalla.
Pumpun komponentti
HPLC-yksikön pumppukomponentti on välttämätön, koska se tuottaa paineen, joka ajaa näytettä kolonnin läpi. Pumpun voimakkuus vaihtelee, mutta voimakas voi tuottaa jopa 6000 psi: n tai puntaa / neliötuuma paineen, joka kohdistetaan näytteen injektoinnin jälkeen. Tämän avulla näyte kulkee pylvään läpi nopeammin ja tehokkaammin kuin jos se tippuisi läpi vain painovoimaa käyttämällä.
Sarakkeen kuvaus
Pumpun pylvään läpi kuljettaman näytteen lisääntynyt nopeus mahdollistaa muun tyyppisen pylvään käytön kuin yksinkertaisessa nestekromatografiassa käytettävät. Pylvään pakkausmateriaalilla voi olla paljon pienempi hiukkaskoko, mikä lisää pinta-alaa ja auttaa siten näytteen vuorovaikutusta kolonnin kanssa. Suurin osa HPLC-pylväistä toimii napaisuuden kautta. Näyte liuotetaan polaariseen liuottimeen ja pylväs koostuu pääosin ei-polaarisista hiilivedyistä. Näytemolekyylin polaariset osat kulkevat kolonnin läpi hyvin nopeasti, koska ne ovat pääasiassa vuorovaikutuksessa liuottimen, kun taas näytteen ei-polaariset komponentit viipyvät kolonnissa muodostaen heikkoja vuorovaikutuksia kolonnin kanssa komponentit. Siksi näytteen komponentit irtoavat pylväästä järjestyksessä polaarisemmasta polaarimattomimpaan.
Ilmaisimen toiminto
Ilmaisimet vaihtelevat myös käytetyn HPLC-laitteen tyypin mukaan. Useimmat toimivat kuitenkin samalla perustavalla tavalla. Ultraviolettivalon lähde loistaa erotettuihin näytekomponentteihin, kun ne tulevat pylväästä. Suurin osa orgaanisista yhdisteistä absorboi tietyn määrän valoa, joten kulkiessaan käytetyn valonsäteen läpi ilmaisin voi havaita absorboituneen valon määrän. Ilmaisin tallentaa myös komponenttien retentioajan niiden sarakkeesta poistumisjärjestyksen perusteella. Tämä tuotos voidaan sitten analysoida piikkialueen perusteella näytteen komponenttien tarkan luonteen määrittämiseksi.