Kõrgefektiivne vedelikkromatograafia on segu laboratoorse analüüsi meetod. See on tõhus kromatograafia tüüp, mis kasutab segu proovi kolonni tõukamiseks mitte ainult raskusjõudu, vaid kõrget rõhku. Proov süstitakse, seejärel aitab suurtes kogustes survet sisaldav pump proovi liikuda mööda pakitud kolonni, kus see eraldatakse üksikuteks komponentideks. Seejärel analüüsitakse seda eraldamist detektoriga tulemuste saamiseks.
Süstekoht
HPLC-sse süstimiseks tuleb proov kõigepealt lahustada polaarses vedelas lahustis, eelistatult teadaolevate HPLC spektritega lahustis, et selle andmeid saaks proovist eristada. Proovi sisaldav vedel lahus asetatakse instrumenti ja saadetakse kolonni. Süstekoha tegelik asukoht sõltub instrumentide kaubamärgist. Enamasti on süstimisprotsess automatiseeritud, kuid mõnel juhul peab laboritöötaja proovi süstima väikese süstlanõelaga.
Pumba komponent
HPLC-seadme pumpkomponent on vajalik, kuna see annab proovi kolonni kaudu liikuva rõhu. Pumba tugevus varieerub, kuid võimas võib tekitada rõhu kuni 6000 psi ehk naela ruuttolli kohta, mis rakendatakse pärast proovi süstimist. See võimaldab proovil kolonni läbida kiiremini ja tõhusamalt kui siis, kui see peaks tilkuma läbi ainult raskusjõu abil.
Veeru kirjeldus
Kolonni kaudu pumba kaudu läbitud proovi suurenenud kiirus võimaldab kasutada erinevat tüüpi kolonni kui need, mida kasutatakse lihtsas vedelikkromatograafias. Kolonni pakkematerjali osakeste suurus võib olla palju väiksem, mis suurendab pinda ja aitab seetõttu proovi interaktsioone kolonniga. Enamik HPLC kolonne töötab läbi polaarsuse. Proov lahustatakse polaarses lahustis ja kolonn koosneb suures osas mittepolaarsetest süsivesinikest. Proovimolekuli polaarsed osad läbivad kolonni väga kiiresti, kuna nad suhtlevad peamiselt lahusti, samas kui proovi mittepolaarsed komponendid püsivad kolonnis, moodustades kolonniga nõrgad koostoimed komponendid. Seetõttu tulevad proovi komponendid kolonnist maha järjestuses kõige polaarsemast kuni polaarsemani.
Detektori funktsioon
Detektorid varieeruvad ka kasutatava HPLC-seadme tüübi järgi. Enamik toimib siiski samal põhilisel viisil. Kolonni küljest eraldatud proovi komponentidele paistab ultraviolettvalguse allikas. Enamik orgaanilisi ühendeid neelab teatud hulga valgust, nii et rakendatud valguskiirest möödudes võib detektor üles võtta, kui palju valgust neeldub. Detektor registreerib ka komponentide retentsiooniaja, lähtudes nende tulbast väljumise järjekorrast. Seejärel saab seda väljundit piigi pindala põhjal analüüsida, et teha kindlaks valimi komponentide täpne olemus.