Isase rohutirtsu reproduktiivorganid koosnevad munanditest, mis hoiavad endas spermatotsüütide rakke, mis jagunevad ja moodustavad lõpuks seemnerakkude paketid; ja aedeagus, mis on sperma pakettide kohaletoimetamise süsteem. Naise rohutirtsu reproduktiivorganid koosnevad munarakkudest, mis on munarakkude sünnitussüsteem, samuti isasloomade reproduktiivorgani sisenemiskoht; ja munasarjad, mis sisaldavad nii mune kui ka mitmesuguseid materjale, mida kasutatakse nende toitmiseks ja hooldamiseks varases arengus.
Kopulatsiooni ajal paigaldab isane rohutirts emase ja sisestab selle aedeaguse emase munasarja. Seejärel toimetab ta oma spermatofoori, tema spermat sisaldava paki, emasesse emakamaksa kaudu. Seda spermat kasutatakse tema paljude munarakkude viljastamiseks paljude väga väikeste käikude kaudu, mida nimetatakse mikrotiilideks. Kui munarakud on viljastatud, püüab emane muneda, kasutades munaraku kehast vabastamiseks sama munarakku, mida kasutati paljunemise ajal.
Kui emane rohutirts on valmis oma munakauna vabastama, kasutab ta oma kõhu peal spetsiaalseid sarvi kaevamiseks ja tolli või kahe maasse kaevamiseks. Seejärel ulatab ta munajuhi kaevatud auku ja paneb kümneid mune sisaldava kauna. Seda kauna kaitseb kahjustuste eest paks kate, mille emane selle protsessi käigus eraldab, mis hiljem kõveneb. Rohutirtsude jaoks toimub paljunemine enne jahedamaid kuid ja nende munetud munad kooruvad siis, kui ilm on hakanud soojenema. See tähendab, et soojemates piirkondades võivad munad kiiresti kooruda, vaid mõne nädalaga, külmemates piirkondades võivad munad koorumata jääda kuni üheksa kuud.