La razón principal por la que tiñe una muestra antes de ponerla bajo el microscopio es para verla mejor, pero la tinción hace mucho más que simplemente resaltar los contornos de las células. Algunas tinciones pueden penetrar las paredes celulares y resaltar los componentes celulares, y esto puede ayudar a los científicos a visualizar los procesos metabólicos. Las manchas también ayudan a distinguir entre células vivas y muertas. Además, la tinción permite a los científicos contar el número de células de un tipo particular dentro de una determinada biomasa. Existen veinte o más tipos diferentes de tinciones, y cada una tiene su propósito.
TL; DR (demasiado largo; No leí)
El objetivo principal de la tinción es resaltar células y partes de células. Existen más de 20 tipos diferentes de tintes, y el tipo de tinte que use depende de lo que esté buscando.
Tipos de manchas
La elección del tinte depende de lo que estés buscando. No todas las tinciones son adecuadas para células vivas, pero las que sí lo son incluyen el marrón Bismarck, el rojo tolueno, el azul Nilo y el rojo Nilo, y ciertos fluorescentes utilizados para resaltar el ADN. Algunas manchas resaltan las esporas, algunas detectan lípidos y proteínas, y algunas cambian de color en presencia de almidones. El propósito del examen determina el mejor tipo de tinte a utilizar. Por ejemplo, un médico que realiza una prueba de Papanicolaou usaría Eosina Y. Es un tinte fluorescente ácido que se vuelve rojo cuando entra en contacto con los glóbulos rojos, el citoplasma y las membranas celulares. También se usa para analizar la médula sanguínea.
En algunos casos, un investigador puede usar más de una tinción. Por ejemplo, la hematoxilina es una tinción que vuelve azules los núcleos celulares. Cuando se usa junto con eosina, que hace que las otras partes de la célula se vuelvan rojas o rosadas, proporciona un contraste más fuerte y hace que los núcleos sean más fáciles de diferenciar. Los frotis de Papanicolaou y las muestras de médula sanguínea son más fáciles de examinar cuando estas dos tinciones se utilizan juntas.
Tinción de Gram: Los trabajadores del hospital usan la tinción de Gram para identificar bacterias dañinas. En realidad, se trata de una serie de colorantes que tienen diferentes efectos sobre diferentes tipos de bacterias y brindan a los médicos una importante herramienta de diagnóstico. La tinción de Gram es un proceso de tres partes. En el primero, se agrega el cristal violeta de Hucker, que tiñe todas las bacterias de un color violeta uniforme. En la siguiente etapa, se agrega la tinción de yodo, lo que hace que el color se adhiera a las células Gram positivas, que son principalmente Staphylococcus y Streptococcus. La mancha se elimina por lavado, dejando las células grampositivas con un color violeta distintivo; luego se introduce una tercera tinción, Safranine O, para mejorar el contraste entre las bacterias Gram-negativas y el resto del material en el portaobjetos.
Procedimiento de tinción
Al preparar una muestra en un portaobjetos, puede montarla en seco o en húmedo, puede cortarla en una sección delgada o puede untarla. Cuando se utiliza un tinte, el procedimiento habitual es montar en húmedo la muestra, lo que significa colocar una gota de agua en el portaobjetos, colocar la muestra en el agua y cubrirla con un cubreobjetos. Luego, aplica el tinte en una esquina del portaobjetos con un gotero y permite que se atraiga hacia la muestra por acción capilar. Es útil colocar una toalla de papel en el lado opuesto del tobogán para atraer el agua. Una vez que la mancha se ha extendido por todo el portaobjetos, la muestra está lista para su examen.