El caldo de nutrientes líquido se usa para cultivar bacterias como Escherichia coli. Las recetas de este caldo varían según la especie bacteriana y la presencia de modificaciones genéticas, por ejemplo, resistencia a los antibióticos. El caldo se puede solidificar agregando agar, lo que permite que las bacterias formen colonias distintas, mientras que en cultivo líquido simplemente se dispersan por todo el volumen. Esta es una técnica básica pero esencial para métodos avanzados como la clonación de genes o los ensayos microbiológicos. Este artículo asume que las cepas estándar de laboratorio de Escherichia coli deben cultivarse en placas de agar con caldo Luria (LB) (o placas de Petri).
Pese 10 gramos de triptona de calidad bacteriana, 5 gramos de extracto de levadura, 5 gramos de cloruro de sodio, 15 gramos de agar o agarosa y 1 mililitro de hidróxido de sodio 1N. Mezclar estos con un volumen de agua esterilizada destilada y esterilizada en autoclave hasta obtener 1 litro de medio. Autoclave el medio en frascos o matraces sin tapar durante 25 minutos. Deje enfriar a aproximadamente 50 grados centígrados antes de agregar reactivos que se destruirán a altas temperaturas, como antibióticos u otros suplementos nutricionales.
Deje que el medio esterilizado en autoclave se enfríe a 50 grados Celsius y no menos de 45 grados Celsius, ya que el agar se asentará en su recipiente antes de poder verterlo. Obtenga placas de Petri estériles y vierta lo suficiente para cubrir toda la superficie de la placa y al menos la mitad de su profundidad. Evite sobrellenar las placas y preferiblemente no permita que el agar entre en contacto con el borde superior del plato. Deje que las placas se solidifiquen en un ambiente estéril (por ejemplo, bajo una campana de flujo laminar) dejando las tapas abiertas y en una esquina de la campana.
Seca los platos. Aunque las placas se pueden usar tan pronto como estén colocadas, habrá algo de humedad en la superficie del agar, lo que evitará que las colonias bacterianas se adhieran lo suficiente. Por lo tanto, es mejor secar las placas antes de aplicar cualquier bacteria, por ejemplo, dejándolas reposar a temperatura ambiente durante unos días o durante media hora bajo una campana de flujo laminar o en 37 grados centígrados incubadora.
Guarde los platos. Los platos secos deben apilarse boca abajo (invertidos) en sus tapas y devolverse a su lugar original. envasado, cerrado con cinta y envuelto en papel de aluminio para protegerlo de la luz o en un envase. Escriba siempre la fecha de preparación en las placas y evite su uso si las placas tienen más de 2 meses.
Referencias
- "Protocolos actuales en biología molecular"; Karen Elbing y Roger Brent; 2002
Consejos
- Lleve a cabo tantos de los pasos anteriores (preferiblemente todos) como sea posible en un entorno estéril (por ejemplo, bajo un llama abierta o una campana de flujo laminar) para evitar que los contaminantes bacterianos transportados por el aire entren y crezcan en el medios de comunicación.
Sobre el Autor
Palmer Owyoung tiene una Maestría en Negocios Internacionales de la Universidad de California en San Diego y una Licenciado en sociología de la Universidad de California en Santa Bárbara y es un especialista molecular capacitado. biólogo. Es escritor autónomo desde 2006. Además de escribir, es comerciante de Forex y comercializador de Internet a tiempo completo.
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