Una de las formas clásicas de determinar la concentración de microbios en una muestra es diluir la muestra, hacer crecer los microbios en placas y contar las colonias. Los microbios en placa crecen a partir de una unidad formadora de colonias que consta de una o más células en una colonia visible que se puede ver y contar. Las bacterias son el microbio más común para evaluar mediante recuentos en placa. Los recuentos de colonias se utilizan para detectar y contar microbios en el suelo, el agua y los alimentos. Los protocolos para contar colonias enfatizan un enfoque preciso y metódico.
Dilución de muestras, plateado e incubación
Si simplemente unta una muestra de microbio en una placa de agar, verá tantas unidades formadoras de colonias que las colonias individuales se mezclarán, haciéndolas imposibles de contar. Para resolver este problema, mezcle la muestra en un medio líquido, tome una pequeña cantidad de esa mezcla y diluya más. Repite este proceso de seis a diez veces. Extienda la dilución final en una placa de agar e incube durante cuatro a siete días antes de contar las colonias.
Conteo manual
El truco principal para contar colonias es contar cada punto de colonia una vez. Un enfoque es colocar la placa de Petri sobre un fondo de cuadrícula y contar las colonias en cada celda de la cuadrícula, moviéndose en un patrón metódico a través de todas las celdas. Marcar las colonias contadas en la parte posterior de la placa de Petri también puede ser un método útil. Generalmente, necesitará contar al menos tres platos; Solo use placas que contengan de 30 a 300 colonias para hacer inferencias sólidas, sugiere Microbiology Network, una firma que brinda servicios de consultoría a laboratorios y fabricantes. Las placas con colonias que son demasiado numerosas para contar o con muy pocas colonias deben volver a sembrarse a partir de una nueva dilución.
Conteo automatizado
El error humano aumenta el tiempo necesario para contar las colonias manualmente. Para mejorar tanto la precisión como la eficiencia, coloque la placa de Petri en un dispositivo de conteo de colonias automatizado. Los contadores de colonias automatizados toman una imagen del plato, separan las colonias del fondo y luego usan un algoritmo para contar las colonias en el plato. Los algoritmos pueden tener dificultades para diferenciar colonias cuando dos o más colonias se tocan en los bordes, por lo que esta es un área de desarrollo de software en curso.
Hacer que contar sea más complicado
La precisión del cálculo de la densidad microbiana a partir del recuento de colonias tiene algunas limitaciones. Las unidades formadoras de colonias pueden ser una sola célula, una cadena de células o un grupo completo de células. El supuesto es que una colonia representa una celda, por lo que las concentraciones calculadas a partir del recuento de colonias pueden ser bajas. Los diferentes microbios necesitan diferentes condiciones de crecimiento, y las colonias en la placa solo representan aquellos microbios que prosperan en ese medio de crecimiento bajo esas condiciones de incubación. Además, el recuento de colonias no registra células muertas, una consideración importante cuando se necesita la concentración de células en la muestra original.