Ο κύριος λόγος για τον οποίο βάφετε ένα δείγμα πριν το βάλετε κάτω από το μικροσκόπιο είναι να το δείτε καλύτερα, αλλά η χρώση κάνει πολύ περισσότερα από το να επισημάνει απλώς τα περιγράμματα των κυττάρων. Μερικοί λεκέδες μπορούν να διεισδύσουν στα κυτταρικά τοιχώματα και να επισημάνουν τα συστατικά των κυττάρων, και αυτό μπορεί να βοηθήσει τους επιστήμονες να οπτικοποιήσουν τις μεταβολικές διεργασίες. Οι λεκέδες βοηθούν επίσης στη διάκριση μεταξύ ζωντανών κυττάρων και νεκρών. Επιπλέον, η χρώση επιτρέπει στους επιστήμονες να μετράνε τον αριθμό των κυττάρων ενός συγκεκριμένου τύπου σε μια συγκεκριμένη βιομάζα. Υπάρχουν είκοσι ή περισσότεροι διαφορετικοί τύποι λεκέδων και ο καθένας έχει το σκοπό του.
TL; DR (Πάρα πολύ καιρό; Δεν διαβάστηκε)
Ο κύριος σκοπός της χρώσης είναι να επισημάνουμε τα κύτταρα και τα μέρη των κυττάρων. Υπάρχουν περισσότεροι από 20 διαφορετικοί τύποι λεκέδων και ο τύπος λεκέδων που χρησιμοποιείτε εξαρτάται από το τι ψάχνετε.
Τύποι λεκέδων
Η επιλογή του λεκέ εξαρτάται από το τι ψάχνετε. Δεν είναι όλοι οι λεκέδες κατάλληλοι για ζωντανά κύτταρα, αλλά εκείνοι που περιλαμβάνουν καφέ Bismarck, κόκκινο τολουόλιο, μπλε του Νείλου και κόκκινο του Νείλου, και ορισμένους φθορισμούς που χρησιμοποιούνται για την επισήμανση του DNA. Μερικοί λεκέδες επισημαίνουν τα σπόρια, μερικά ανιχνεύουν λιπίδια και πρωτεΐνες, και άλλα αλλάζουν χρώμα παρουσία αμύλου. Ο σκοπός της εξέτασης καθορίζει τον καλύτερο τύπο λεκές για χρήση. Για παράδειγμα, ένας ιατρός που κάνει ένα επίχρισμα PAP θα χρησιμοποιούσε το Eosin Y. Είναι μια όξινη φθορίζουσα βαφή που γίνεται κόκκινη όταν έρχεται σε επαφή με ερυθρά αιμοσφαίρια, κυτταρόπλασμα και κυτταρικές μεμβράνες. Χρησιμοποιείται επίσης για τον έλεγχο του μυελού του αίματος.
Σε ορισμένες περιπτώσεις, ένας ερευνητής μπορεί να χρησιμοποιεί περισσότερες από μία κηλίδες. Για παράδειγμα, η αιματοξυλίνη είναι ένας λεκές που μετατρέπει τους πυρήνες των κυττάρων σε μπλε. Όταν χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με την ηωσίνη, η οποία μετατρέπει τα άλλα μέρη του κυττάρου σε κόκκινο ή ροζ χρώμα, παρέχει ισχυρότερη αντίθεση και διευκολύνει τη διάκριση των πυρήνων. Τα επιχρίσματα PAP και τα δείγματα μυελού αίματος είναι ευκολότερα να εξεταστούν όταν χρησιμοποιούνται αυτοί οι δύο λεκέδες.
Gram's Stain: Οι εργαζόμενοι στο νοσοκομείο χρησιμοποιούν το λεκέ Gram για να εντοπίσουν επιβλαβή βακτήρια. Πρόκειται πραγματικά για μια σειρά χρωστικών που έχουν διαφορετικά αποτελέσματα σε διαφορετικούς τύπους βακτηρίων και δίνουν στους γιατρούς ένα σημαντικό διαγνωστικό εργαλείο. Η κηλίδα του Gram είναι μια διαδικασία τριών μερών. Στο πρώτο, προστίθεται το κρυσταλλικό βιολετί του Hucker, το οποίο χρωματίζει όλα τα βακτήρια ομοιόμορφο ιώδες χρώμα. Στο επόμενο στάδιο, προστίθεται χρώση ιωδίου, η οποία προκαλεί την προσκόλληση του χρώματος στα θετικά κατά Gram κύτταρα, τα οποία είναι κυρίως Staphylococcus και Streptococcus. Ο λεκές ξεπλένεται, αφήνοντας τα θετικά κατά Gram κύτταρα με ένα ξεχωριστό ιώδες χρώμα. Στη συνέχεια, ένα τρίτο λεκέ, το Safranine O, εισάγεται για να ενισχύσει την αντίθεση μεταξύ των αρνητικών κατά Gram βακτηρίων και του υπόλοιπου υλικού στο slide.
Διαδικασία χρώσης
Όταν προετοιμάζετε ένα δείγμα σε μια διαφάνεια, μπορείτε να το στεγνώσετε ή να το τοποθετήσετε σε υγρή βάση, μπορείτε να το κόψετε σε ένα λεπτό τμήμα ή να το λερώσετε. Όταν χρησιμοποιείτε λεκέ, η συνήθης διαδικασία είναι να τοποθετήσετε υγρό το δείγμα, που σημαίνει να τοποθετήσετε μια σταγόνα νερού στη διαφάνεια, να τοποθετήσετε το δείγμα στο νερό και να το καλύψετε με ένα κάλυμμα. Στη συνέχεια, εφαρμόστε το λεκέ σε μια γωνία της αντικειμενοφόρου πλάκας με ένα σταγονόμετρο και αφήστε το να τραβηχτεί προς το δείγμα με τριχοειδή δράση. Βοηθά να τοποθετήσετε μια χαρτοπετσέτα στην αντίθετη πλευρά της διαφάνειας για να προσελκύσετε το νερό. Μόλις ο λεκές απλωθεί σε ολόκληρη τη διαφάνεια, το δείγμα είναι έτοιμο για εξέταση.