Ο υγρός θρεπτικός ζωμός χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια βακτηρίων όπως το Escherichia coli. Οι συνταγές για αυτόν τον ζωμό ποικίλλουν ανάλογα με το βακτηριακό είδος και την παρουσία γενετικών τροποποιήσεων, π.χ., ανθεκτικότητας στα αντιβιοτικά. Ο ζωμός μπορεί να στερεοποιηθεί με προσθήκη άγαρ, το οποίο επιτρέπει στα βακτήρια να σχηματίσουν διακριτές αποικίες, ενώ σε υγρή καλλιέργεια απλώς διασκορπίζονται σε όλο τον όγκο. Αυτή είναι μια βασική αλλά ουσιαστική τεχνική για προηγμένες μεθόδους όπως η κλωνοποίηση γονιδίων ή μικροβιολογικές δοκιμασίες. Αυτό το άρθρο προϋποθέτει ότι τα τυπικά εργαστηριακά στελέχη Escherichia coli πρέπει να καλλιεργούνται σε πλάκες άγαρ Luria ζωμού (LB) (ή τρυβλία Petri).
Ζυγίζονται 10 γραμμάρια τρυπτόνης βακτηριακού βαθμού, 5 γραμμάρια εκχυλίσματος ζύμης, 5 γραμμάρια χλωριούχου νατρίου, 15 γραμμάρια άγαρ ή αγαρόζη και 1 χιλιοστόλιτρο υδροξειδίου του νατρίου 1Ν. Ανακατέψτε τα με όγκο αποσταγμένου και αυτόκλειστου αποστειρωμένου νερού έως ότου ληφθεί 1 λίτρο μέσου. Αυτόματη αποθήκευση του μέσου σε φιάλες ή φιάλες χαλαρά για 25 λεπτά. Αφήστε να κρυώσει περίπου στους 50 βαθμούς Κελσίου πριν προσθέσετε αντιδραστήρια που θα καταστραφούν σε υψηλή θερμότητα, όπως αντιβιοτικά ή άλλα συμπληρώματα διατροφής.
Αφήστε το μέσο αυτόκλειστου να κρυώσει στους 50 βαθμούς Κελσίου και όχι λιγότερο από 45 βαθμούς Κελσίου, καθώς το άγαρ θα βυθιστεί στο δοχείο του πριν μπορέσει να χυθεί. Πάρτε αποστειρωμένα τρυβλία Petri και ρίξτε αρκετό για να καλύψετε ολόκληρη την επιφάνεια της πλάκας και τουλάχιστον το μισό του βάθους της. Αποφύγετε την υπερπλήρωση των πλακών και κατά προτίμηση μην αφήνετε το άγαρ να έρθει σε επαφή με το άνω άκρο του πιάτου. Αφήστε τις πλάκες να στερεοποιηθούν σε ένα αποστειρωμένο περιβάλλον (π.χ. κάτω από ένα κάλυμμα στρωτής ροής) αφήνοντας τα καπάκια μακριά και σε μια γωνία του απορροφητήρα.
Στεγνώστε τις πλάκες. Παρόλο που οι πλάκες μπορούν να χρησιμοποιηθούν μόλις στερεωθούν, θα υπάρχει κάποια υγρασία στην επιφάνεια του άγαρ, το οποίο θα αποτρέψει την επαρκή προσκόλληση των βακτηριακών αποικιών. Επομένως, είναι καλύτερο να στεγνώσετε τις πλάκες πριν εφαρμόσετε οποιαδήποτε βακτήρια, για παράδειγμα αφήνοντάς τα να καθίσουν θερμοκρασία δωματίου για λίγες ημέρες ή για μισή ώρα κάτω από στρωτή κουκούλα ροής ή σε 37 βαθμούς Κελσίου εκκολαπτήριο.
Αποθηκεύστε τις πλάκες. Τα αποξηραμένα πιάτα πρέπει να στοιβάζονται ανάποδα (ανεστραμμένα) στα καπάκια τους και να επιστρέφονται στο αρχικό τους συσκευασία, κλείσιμο με ταινία και είτε τυλιγμένο σε φύλλο για προστασία από το φως ή σε κατάλληλο δοχείο. Να γράφετε πάντα την ημερομηνία προετοιμασίας στις πλάκες και να αποφεύγετε τη χρήση εάν οι πλάκες είναι άνω των 2 μηνών.
βιβλιογραφικές αναφορές
- "Τρέχοντα πρωτόκολλα στη μοριακή βιολογία" · Karen Elbing και Roger Brent 2002
Συμβουλές
- Εκτελέστε όσο το δυνατόν περισσότερα από τα παραπάνω βήματα (κατά προτίμηση όλα) σε ένα αποστειρωμένο περιβάλλον (π.χ. υπό ανοιχτή φλόγα, ή κάλυμμα στρωτής ροής) για να σταματήσει η είσοδος και η ανάπτυξη των αερομεταφερόμενων βακτηριδιακών ρύπων μεσο ΜΑΖΙΚΗΣ ΕΝΗΜΕΡΩΣΗΣ.
Σχετικά με τον Συγγραφέα
Ο Palmer Owyoung είναι κάτοχος Master of Arts σε διεθνείς επιχειρήσεις από το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Σαν Ντιέγκο και α Πτυχίο Κοινωνιολογίας από το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στη Σάντα Μπάρμπαρα και είναι εκπαιδευμένο μοριακό βιολόγος. Είναι ανεξάρτητος συγγραφέας από το 2006. Εκτός από τη γραφή, είναι έμπορος Forex πλήρους απασχόλησης και έμπορος Διαδικτύου.
Φωτογραφικές μονάδες
Jupiterimages / Comstock / Getty Images