Ο δάσκαλός σας σας δίνει ένα δείγμα βακτηρίων και σας ρωτά: Πόσους βιώσιμους μικροοργανισμούς υπάρχουν σε αυτό το δείγμα; Τι σημαίνει αυτό και πώς το καταλαβαίνετε; Ένας τρόπος είναι να βρείτε τον αριθμό μονάδες σχηματισμού αποικιών(CFU).
Τι είναι το CFU;
Η CFU αναφέρεται στον αριθμό μεμονωμένων αποικιών οποιουδήποτε μικροοργανισμού που αναπτύσσεται σε μια πλάκα μέσων. Αυτή η τιμή με τη σειρά της αντιπροσωπεύει τον αριθμό των βακτηρίων που μπορούν να αναπαραχθούν καθώς έχουν σχηματίσει αποικίες στην πλάκα. Υπάρχει ένας τύπος CFU που περιλαμβάνει δειγματοληψία.
Πώς βρίσκετε CFU;
Η μέτρηση του αριθμού των βακτηρίων σε ένα υγρό δείγμα είναι πολύ δύσκολη. Υπάρχουν πάρα πολλά από αυτά και είναι πολύ μικρά. Επιπλέον, μερικοί από αυτούς μπορεί να είναι νεκροί και άλλοι ζωντανοί, και οι νεκροί δεν πρέπει να υπολογίζονται στο σύνολο. Σας ενδιαφέρει μόνο βιώσιμος βακτήρια ή βακτήρια που μπορούν να αναπαραχθούν. Λοιπόν, πώς μπορείτε να καταλάβετε πόσα βακτήρια έχετε;
Με τον ίδιο τρόπο που μπορείτε να συμμετάσχετε σε δημοσκόπηση 1.000 ατόμων και να την εφαρμόσετε σε 10.000 άτομα για να καταλάβετε πώς σκέφτονται για ένα συγκεκριμένο θέμα. Μπορείτε να δοκιμάσετε και να πάρετε ένα μικρό μέρος του αρχικού σας δείγματος, να μάθετε πόσα βακτήρια υπάρχουν αυτό το μέρος και, στη συνέχεια, υπολογίστε για να υπολογίσετε πόσα θα μπορούσαν να υπήρχαν στο πρωτότυπο δείγμα.
Χρησιμοποιώντας αραιώσεις για να βρείτε CFU
Η διαδικασία εύρεσης CFU ενός δεδομένου δείγματος περιλαμβάνει πρώτα την αραίωση αυτού του δείγματος. Οι αραιώσεις μετά τοποθετούνται σε πλάκες με το σωστό μέσο ανάπτυξης. Οι πολλαπλές αραιώσεις είναι συχνά μια καλή ιδέα, καθώς το αρχικό δείγμα μπορεί να είναι πολύ συγκεντρωμένο.
Αφού αφήσετε τα βακτήρια να αναπτυχθούν στις πλάκες για ένα δεδομένο χρονικό διάστημα, μεμονωμένες αποικίες μετράται σε ένα πιάτο. Εάν το δείγμα ήταν πολύ συμπυκνωμένο τότε αντί για μεμονωμένες αποικίες θα δείτε μια μεγάλη περιοχή καλυμμένη με βακτηριακή ανάπτυξη που ονομάζεται α γκαζόν. Αυτό σημαίνει ότι πρέπει να αραιώσετε περαιτέρω το δείγμα σας και να προσπαθήσετε να μεγαλώσετε ξανά ώστε να μπορείτε να δείτε μεμονωμένες αποικίες.
Καθώς οι μεμονωμένες αποικίες προέρχονται από ένα μόνο βακτήριο που αναπαράγεται πολλές φορές, μόνο αυτά υπολογίζονται στο CFU.
Πειραματική διαδικασία για την εύρεση CFU
Ένα παράδειγμα χρήσης αραιώσεων για τον υπολογισμό CFU θα μπορούσε να έχει ως εξής: Πρώτον, από το αρχικό δείγμα που σας δίνει ο δάσκαλός σας, παίρνετε 1 mL και τοποθετείτε το. Την επόμενη μέρα θα δείτε ότι υπάρχει γκαζόν βακτηρίων. Αυτό σημαίνει ότι δεν μπορείτε να μετρήσετε τον αριθμό CFU. Το επόμενο βήμα είναι να κάνουμε κάποιες αραιώσεις.
Αρχικά, παίρνετε 1 mL δείγματος και αραιώστε το σε 9 mL υγρού μέσου. Δεδομένου ότι η αραίωση είναι ένα μέρος δείγματος έως εννέα μέρη αραιωτικού, αναφέρεται ως αραίωση 1:10. Στη συνέχεια, παίρνετε 1 mL της αραίωσης 1:10 και προσθέστε το σε 9 mL υγρού μέσου. Αυτή η αραίωση είναι αραίωση 1: 100. Τέλος, κάνετε αραίωση 1: 1.000 λαμβάνοντας 1 mL αραίωσης 1: 100 και προσθέτοντας 9 mL υγρού μέσου. Για κάθε αραίωση, έχετε πλέον 10 mL αραιωμένης βακτηριακής καλλιέργειας.
Οι αραιώσεις ολοκληρώθηκαν, τοποθετείτε 0,5 mL των αραιώσεων σε πλάκες. Φροντίστε να επισημάνετε τις πλάκες με τις οποίες αραιώθηκε.
Την επόμενη μέρα επιστρέφεις και βλέπεις ότι όλες οι πλάκες έχουν κάποιες μεμονωμένες αποικίες πάνω τους. Θέλετε να διαλέξετε ένα πιάτο ανάμεσα 30 και 300 αποικίες. Βλέπετε ότι η πλάκα αραίωσης 1: 1.000 έχει περίπου 10 αποικίες, έτσι αυτό σημαίνει ότι έχετε αραιώσει το δείγμα. Αυτό το πιάτο δεν θα είναι χρήσιμο στην εύρεση CFU.
Η πλάκα αραίωσης 1:10 έχει πολλές αποικίες, ίσως περισσότερες από 300. Σε αυτήν την περίπτωση μπορείτε να πάτε στο πιάτο 1: 100. Μετράτε τις αποικίες σε αυτό το πιάτο και διαπιστώνετε ότι έχει 179 αποικίες. Αυτό σημαίνει ότι 0,5 mL της αραίωσης 1: 100 περιέχει 179 CFU. Τι γίνεται όμως με το αρχικό δείγμα;
Τι είναι ο υπολογισμός CFU;
Τώρα που έχετε κάποια δεδομένα, μπορείτε να κάνετε τον υπολογισμό CFU στο αρχικό δείγμα.
1. Πάρτε την ποσότητα που επιμεταλλώσατε (0,5 mL) και πολλαπλασιάστε με τον συντελεστή αραίωσης (0,01) για να αποδώσετε 0,005. Πρέπει να το κάνετε αυτό για να βρείτε τον παράγοντα αραίωσης που απέδωσε τον αριθμό CFU. Εδώ, μισό χιλιοστόλιτρο της αραίωσης 1: 100 σας επέτρεψε να μετρήσετε CFU.
2. Διαιρέστε το CFU από την αραίωση (179) με το αποτέλεσμα από το Βήμα 1 (0,005) για να αποδώσετε 35,800 CFU.
Αυτό σημαίνει ότι το αρχικό 1 mL δείγματος που αραιώθηκε περιέχει 35.800 CFU. Ένας άλλος τρόπος να το πούμε είναι να πούμε ότι το αρχικό δείγμα έχει 35.800 CFU / mL.
Το CFU είναι ένα εξαιρετικό εργαλείο για να βρείτε πόσα βακτήρια, μύκητες ή μικροοργανισμούς υπάρχουν σε ένα δεδομένο δείγμα. Η μέθοδος επίστρωσης που περιγράφεται εδώ είναι ιδιαίτερα χρήσιμη για πολύ συμπυκνωμένα δείγματα ή οργανισμούς που δεν αναπτύσσονται καλά σε υγρή καλλιέργεια.