Το θρεπτικό άγαρ είναι ένας τύπος σύνθετου μέσου γενικής χρήσης που χρησιμοποιείται κυρίως για την καλλιέργεια μιας ποικιλίας μικροοργανισμών.
Πολύπλοκα μέσα μικροβιολογία μιλώντας, είναι μέσα ανάπτυξης που αποτελούνται από μια σειρά διαθέσιμων θρεπτικών ουσιών και μορίων πρωτεΐνης σε άγνωστες συγκεντρώσεις. Το θρεπτικό άγαρ χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια μη επιφυλακτικών μικροβίων όπως βακτηρίων και ζύμης.
Τι μεγαλώνει με το Nutrient Agar;
Οι μικροοργανισμοί χρειάζονται τροφή, νερό και κατάλληλο περιβάλλον για να επιβιώσουν και να αναπτυχθούν. Θρεπτικό άγαρ παρέχει αυτούς τους πόρους για πολλούς τύπους μικροβίων, από μύκητες όπως μαγιά και μούχλα σε κοινά βακτήρια όπως Στρεπτόκοκκος και Σταφυλόκοκκος.
Τα μικρόβια που μπορούν να αναπτυχθούν σε σύνθετα μέσα όπως θρεπτικό άγαρ μπορούν να περιγραφούν ως ανυπόμονοι οργανισμοί. Οι ανθεκτικοί οργανισμοί είναι μικρόβια που μπορούν να αναπτυχθούν και να ευδοκιμήσουν χωρίς ειδικές διατροφικές ή περιβαλλοντικές συνθήκες.
Ορισμένα βακτήρια δεν μπορούν να αναπτυχθούν με θρεπτικό μέσο άγαρ.
Ικανοποιητικοί οργανισμοί (επιλεκτικά βακτήρια) μπορεί να χρειάζονται μια πολύ συγκεκριμένη πηγή τροφής που δεν παρέχεται σε θρεπτικό άγαρ. Ένα παράδειγμα ενός επιφυλακτικού οργανισμού είναι Treponema pallidum, βακτήρια που προκαλούν σύφιλη. Οι επιστήμονες προσπαθούν ανεπιτυχώς να αναπτύξουν αυτό το βακτήριο σε μια κουλτούρα για πάνω από 100 χρόνια.Το θρεπτικό άγαρ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την καλλιέργεια μικροοργανισμών για διάφορους σκοπούς. Μία χρήση είναι η καλλιέργεια και η διατήρηση συγκεκριμένων αποικιών μη επιφυλακτικών οργανισμών για επιστημονική μελέτη ή αναγνώριση. Μια άλλη χρήση είναι η ανίχνευση και ποσοτικοποίηση της παρουσίας δυνητικά επιβλαβών βακτήρια ή άλλα μικρόβια σε νερό, λύματα, οστρακοειδή, κρέας, γαλακτοκομικά προϊόντα και άλλα προϊόντα διατροφής.
Το μέσο πρέπει να διατηρείται αποστειρωμένο προκειμένου να διασφαλιστεί ότι τα μόνα μικρόβια που αναπτύσσονται είναι αυτά που προορίζονται για καλλιέργεια και δεν αναπτύσσονται ως αποτέλεσμα μόλυνσης του μέσου.
Συστατικά Agar Nutrient
Το κύριο συστατικά σε θρεπτικό άγαρ είναι πεπτόνη, εκχύλισμα βοείου κρέατος και άγαρ. Αυτά τα συστατικά κονιοποιούνται και στη συνέχεια προστίθενται σε απεσταγμένο νερό. Η ειδική σύνθεση των θρεπτικών συστατικών άγαρ μπορεί να διαφέρει ελαφρώς ανάλογα με τον κατασκευαστή και την πηγή των συστατικών που χρησιμοποιούνται.
Η σύνθεση παρασκευασμένου θρεπτικού μέσου άγαρ είναι 0,5% πεπτόνη, 0,3% εκχύλισμα βοείου κρέατος (ή εκχύλισμα ζύμης), 1,5% άγαρ και 0,5% χλωριούχο νάτριο.
Ορισμός άγαρ
Για να ορίσετε το άγαρ, σκεφτείτε έναν σύνθετο υδατάνθρακα που προέρχεται από θαλάσσια κόκκινα φύκια που δρα ως στερεοποιητικός παράγοντας στο θρεπτικό μέσο. Δεν έχει θρεπτική αξία για την καλλιέργεια μικροβίων.
Αγάρ πηκτές σε θερμοκρασία 113 βαθμούς Φαρενάιτ (45 βαθμούς Κελσίου) και λιώνει στους 203 βαθμούς Φαρενάιτ (95 βαθμούς Κελσίου). Το Agar περιλαμβάνει επίσης ποικιλίες ποιότητας τροφίμων που μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως πυκνωτικό συστατικό για σούπες, ζελέ και άλλα τρόφιμα.
Ορισμός πεπτόνης
ο ορισμός της πεπτόνης είναι μια διαλυτή πρωτεΐνη που σχηματίζεται στα αρχικά στάδια της πρωτεϊνικής διάσπασης κατά τη διαδικασία της πέψης. Παρασκευάζεται με μερική πέψη πρωτεϊνικών υλικών όπως κρέας, ζελατίνη και καζεΐνη χρησιμοποιώντας οξέα ή ένζυμα.
Ο σκοπός της πεπτόνης στο θρεπτικό μέσο άγαρ είναι να παρέχει την κύρια πηγή οργανικού αζώτου για την αναπτυσσόμενη μικροβιακή καλλιέργεια και μπορεί επίσης να είναι πηγή υδατανθράκων και βιταμινών. Η ακριβής σύνθεση της πεπτόνης στο θρεπτικό μέσο θα διαφέρει ανάλογα με την πηγή πρωτεΐνης και τη μέθοδο πέψης.
Εκχύλισμα βοείου κρέατος
ο εκχύλισμα βοείου κρέατος χρησιμοποιείται για την παρασκευή του θρεπτικού μέσου άγαρ είναι ένα μείγμα υδατοδιαλυτών σωματιδίων ζωικού ιστού, υδατανθράκων, οργανικών αζωτούχων ενώσεων, βιταμινών και αλατιού.
Το εκχύλισμα ζύμης μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την παρασκευή θρεπτικού άγαρ και παρέχει παρόμοιες ενώσεις. Ο σκοπός των ενώσεων στο εκχύλισμα βοείου κρέατος είναι να βοηθήσει στην ανάπτυξη των βακτηρίων που καλλιεργούνται στο θρεπτικό μέσο άγαρ.
Απεσταγμένο νερό
Απεσταγμένο νερό χρησιμοποιείται συνήθως για την παρασκευή θρεπτικού μέσου άγαρ. Το απεσταγμένο νερό είναι νερό που έχει υποστεί επεξεργασία για την απομάκρυνση τυχόν διαλυμένων ρύπων και μετάλλων.
Το απεσταγμένο νερό που υπάρχει στο θρεπτικό μέσο άγαρ είναι απαραίτητο για τις διαδικασίες ζωής των μικροοργανισμών που αναπτύσσονται εκεί, όπως και το νερό είναι απαραίτητο για τις διαδικασίες ζωής όλων των ζωντανών όντων. Η προσθήκη χλωριούχου νατρίου στο μείγμα καθιστά το περιβάλλον καλλιέργειας παρόμοιο με αυτό κυτόπλασμα.
Προετοιμασία του θρεπτικού μέσου αγάρ
Για να γίνει σωστά παρασκευάστε ένα μείγμα θρεπτικών αγάρ για βακτηριακή καλλιέργεια, είναι σημαντικό να αναφερθείτε σε συγκεκριμένες οδηγίες που παρέχονται από τον κατασκευαστή θρεπτικών ουσιών. Ορισμένα συστατικά ή ποσότητες μπορεί να διαφέρουν ελαφρώς ανάλογα με την πηγή του θρεπτικού άγαρ.
- Διαλύστε 28 γραμμάρια σκόνης άγαρ σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού.
- Ζεσταίνετε το μείγμα σε βρασμό, ανακατεύοντας συνεχώς. Συνεχίστε να βράζετε και ανακατεύετε το μείγμα για περίπου ένα λεπτό ή μέχρι να διαλυθεί όλη η σκόνη.
- Αυτόκλειστο το διαλυμένο μείγμα για 15 λεπτά στους 249,8 βαθμούς Φαρενάιτ (121 βαθμούς Κελσίου).
- Αφήστε το μίγμα άγαρ να κρυώσει ελαφρώς. Διανείμετε σε πλάκες ή σωλήνες. Αφήστε να στερεοποιηθεί.
- Αντικαταστήστε τα καπάκια και αποθηκεύστε σε δροσερό, σκοτεινό και αποστειρωμένο περιβάλλον, όπως το ψυγείο. Κατάστημα πλάκες άγαρ (Τρυβλία Petri) ανάποδα για την αποφυγή σχηματισμού συμπύκνωσης στο μέσο.
Το τελικό ρΗ του παρασκευασμένου θρεπτικού μέσου άγαρ πρέπει να είναι 6,8. Το μέσο πρέπει να είναι ανοιχτό πορτοκαλί χρώμα και να έχει τη συνοχή της σταθερής ζελατίνης. Το προετοιμασμένο θρεπτικό μέσο άγαρ πρέπει να διαρκεί στο ψυγείο για έως και δύο χρόνια, εκτός εάν υπάρχει σημαντική αλλαγή στην εμφάνιση του μέσου που θα υποδεικνύει μόλυνση.