Chemiker verwenden Hochleistungsflüssigkeitschromatographie oder HPLC, um Mischungen von Verbindungen zu trennen. Im Allgemeinen besteht das Verfahren darin, eine Probe in eine Säule zu injizieren, wo sie sich mit einem oder mehreren Lösungsmitteln vermischt. Verschiedene Verbindungen adsorbieren oder „kleben“ in unterschiedlichem Maße an der Säule; und wenn das Lösungsmittel die Verbindungen durch die Säule drückt, verlässt eine der Komponenten der Mischung die Säule zuerst. Das Gerät erkennt die Verbindungen beim Verlassen der Säule und erstellt ein Chromatogramm, das aus einem Diagramm mit der Retentionszeit auf der x-Achse und der Signalintensität vom Detektor auf der y-Achse besteht. Wenn die Verbindungen die Säule verlassen, erzeugen sie „Peaks“ im Chromatogramm. Im Allgemeinen gilt: Je weiter auseinander und je schmaler die Peaks im Chromatogramm sind, desto höher ist die Auflösung. Wissenschaftler halten eine Auflösung von 1,0 oder höher für eine ausreichende Trennung.
Messen Sie die Breite zweier benachbarter Peaks im Chromatogramm, indem Sie notieren, wo die x-Achsen-Werte an der Basis jedes Peaks liegen. Die x-Achse stellt die Retentionszeit dar, die normalerweise in Sekunden gemessen wird. Wenn also ein Peak bei 15,1 Sekunden beginnt und bei 18,5 Sekunden endet, beträgt seine Breite (18,5 - 15,1) = 3,4 Sekunden.
Bestimmen Sie die Retentionszeiten, indem Sie die Zeit notieren, d. h. die Position auf der x-Achse, die den Positionen der Maxima der Peaks entspricht. Dieser Wert liegt normalerweise ungefähr in der Mitte zwischen den beiden Werten, die zur Berechnung der Breite in Schritt 1 verwendet wurden. Das in Schritt 1 gegebene Beispiel würde beispielsweise ein Maximum bei etwa 16,8 Sekunden aufweisen.
Berechnen Sie die Auflösung R zwischen zwei Peaks wie folgt:
R=\frac{RT_1-RT_2}{0.5(W_1+W_2)}
wo RT1 und RT2 die Retentionszeiten der Peaks 1 und 2 darstellen und W1 und W2 repräsentieren die Breiten der Peaks an ihren Basen. In Fortsetzung des Beispiels aus den Schritten 2 und 3 weist ein Peak eine Retentionszeit von 16,8 Sekunden und eine Breite von 3,4 Sekunden auf. Wenn der zweite Peak eine Retentionszeit von 21,4 Sekunden bei einer Breite von 3,6 Sekunden aufweist, wäre die Auflösung:
R=\frac{21,4-16,8}{0,5(3,4+3,6)}=1,3
Dinge, die du brauchen wirst
- HPLC-Chromatogramm
- Taschenrechner