Die Gelelektrophorese ist eine in Laboratorien verwendete Methode zur Trennung von DNA (Desoxyribonukleinsäure). Es kann auch verwendet werden, um RNA und Proteine zu trennen.
Das Ablesen von Gelelektrophoreseergebnissen ermöglicht es den Forschern, die Größe der Stränge in einer Probe zu bestimmen. Um zu verstehen, wie der Prozess funktioniert, muss man zuerst die Definition der Gelelektrophorese lernen.
Definition der Gelelektrophorese
Gelelektrophorese ist ein leistungsstarkes Werkzeug, das in Molekularbiologie um die Größe und elektrische Ladung von DNA, RNA und Proteinen zu bestimmen. Sie beginnen mit der Verwendung von DNA-Stücken, die von Enzymen aus einem größeren DNA-Strang verdaut wurden.
Anhand der Intensität der Gelelektrophorese-Bande als Ergebnis können Sie die Größe der Fragmente ermitteln. Man erhält dann a DNA-Fingerabdruck.
Wie der „Elektro“-Teil des Wortes verrät, ist a Definition der Gelelektrophorese erfordert die Verwendung eines elektrischen Feldes. Es wird eine spezielle Maschine verwendet, die eine Pufferlösung enthält, die die Elektroden bedeckt, eine Vertiefung zum Aufhängen des Gels und die Elektroden selbst.
Das Gel in der Gelelektrophorese
Gelelektrophorese erfordert die Verwendung eines Gels, das zu einer Platte geformt wird, die typischerweise aus einer gereinigten Version von Agar aus Algen namens Agarose besteht.
Agarosegele bilden eine poröse Matrix, durch die geladene Moleküle unterschiedlicher Größe mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten wandern können. Eine Chemikalie namens Ethidiumbromid (EtBr) wird der Gellösung hinzugefügt, bevor sie in eine Form gegossen wird.
Wenn Sie sehr kleine DNA- oder Proteinmoleküle trennen müssen, müssen Sie möglicherweise a Polyacrylamidgel statt Agarose. Vorsicht bei der Verwendung von Polyacrylamid, denn es ist neurotoxisch.
Ein spezieller Kamm wird in die Agarosegelform gelegt und nach dem Erstarren vorsichtig entfernt. Hier werden das DNA-Fragment oder andere molekulare Proben platziert, die zuvor mit einem speziellen Ladefarbstoff vermischt wurden. Das Farbstoff laden dient nur dazu, die Bewegung der DNA zu verfolgen, da sie sonst nicht sichtbar ist.
Es gibt auch einen Brunnen, der das sogenannte a. enthält DNA-Leiter oder Markierung. Diese dient als hochwertiges Template mit bekannten Bandengrößen zum Größenvergleich mit den untersuchten DNA-Proben. Sobald das elektrische Feld angelegt wird, wandern diese negativ geladenen Moleküle durch das Gel zum positiven Ende.
Ergebnisse der Gelelektrophorese
Sobald die Moleküle das Ende des Gels erreicht haben, ist es Zeit zum Lesen Ergebnisse der Gelelektrophorese. Der EtBr-Farbstoff im Gel bindet leicht an DNA, daher seine Verwendung, und dann können Sie DNA-Banden unter UV-Licht fluoreszieren sehen.
Sie müssen sehr vorsichtig sein, Ethidiumbromid nicht zu berühren, denn seine Affinität zur DNA bedeutet auch, dass es diese abwickeln kann; es gilt daher als mutagen. Neuere, sicherere Farbstoffe sind jetzt erhältlich, obwohl ihre Preispunkte höher sind.
Das UV-Licht zeigt die Gelelektrophorese-Bandenintensität der DNA oder anderer molekularer Proben. Die Lage der Banden auf einem Gel verrät die Größe der DNA-Fragment. Das Intensität der Gelelektrophorese-Bande gibt die Konzentration des Moleküls an.
Jetzt können Sie die DNA-Banden in Ihren Proben mit der DNA-Leiterprobe vergleichen. Die bekannten Bandengrößen der Leiter helfen Ihnen, die relative Größe der untersuchten DNA zu bestimmen.
Die Bedeutung einer qualitativ hochwertigen Gelelektrophorese
Gelelektrophorese wurde in DNA-Fingerabdruck und Forensik. Es hat Forschern geholfen, Informationen über das Genom vieler Arten zu ermitteln. Die Verwendung qualitativ hochwertiger Gelelektrophoreseergebnisse ist für diese wichtigen Bereiche unerlässlich.
Daher ist es entscheidend, mit hochwertigen Inhaltsstoffen zu arbeiten und die Gele mit großer Sorgfalt herzustellen. Es ist wichtig, die Kontamination von DNA-Proben mit RNA oder Proteinen zu verhindern.
Stellen Sie sicher, dass Sie sauberen Puffer verwenden, gießen Sie das Gel vorsichtig ein, damit die Kammvertiefungen gleichmäßig gebildet werden, und halten Sie alle Reagenzien auf der richtigen Temperatur. Gelelektrophorese Die Bandenintensität sollte lebendig und sauber sein, ohne Spuren anderer DNA im Hintergrund und keine Schlieren von RNA oder Proteinen, die das Gel verunreinigen.