Wissenschaftler und Techniker müssen oft die Konzentration von Zellen in einer Suspension berechnen. Wenn einem Patienten beispielsweise in einer Arztpraxis Blut abgenommen wird, kann das Labor mit bestimmten Methoden nach der Menge der weißen Blutkörperchen in einer bestimmten Blutmenge suchen. Dies gibt dem Arzt viele Informationen über den Gesundheitszustand ihres Patienten, insbesondere über sein Immunsystem und ob er eine Infektion oder eine andere Krankheit bekämpft. Tests wie dieser können nach vielen anderen Zellen im Blut sowie in Rückenmarksflüssigkeit und anderen Körperflüssigkeiten suchen, z. Wissenschaftler berechnen auch Zellkonzentrationen von Bakterien, Hefen und anderen Mikroorganismen für zahlreiche Zwecke, von der ökologischen Forschung bis hin zu industriellen Technologien. Eine der gebräuchlichsten Techniken wird auch in vielen Biologieklassen an Colleges gelehrt und verwendet ein Gerät, das als Zählkammer bezeichnet wird.
Bevor die Zellsuspension in die Zählkammer gelangen kann, muss sie möglicherweise verdünnt werden, da sie Tausende oder Millionen von Zellen enthalten kann. In diesem Fall können die Zellen nicht vernünftig gezählt werden. Um die Probe zu verdünnen, geben Sie mit einer sterilen Pipette zehn Mikroliter der Zelllösung in ein Reagenzglas mit 90 Mikroliter Verdünnungsmittel. Die Art des Verdünnungsmittels hängt von der Art der Zelle ab. Mischen Sie es gut. Diese Lösung ist jetzt zehnmal stärker verdünnt als die Ausgangsprobe, ihr Verdünnungsfaktor beträgt also 10
Möglicherweise müssen Sie mehrere Verdünnungen ausprobieren, um den richtigen Verdünnungsfaktor für die Zählkammer zu bestimmen. Eine Zählkammer ist im Grunde eine sehr kleine, klare, rechteckige Schachtel mit einer genauen Tiefe und einem genauen Raster, das über der Oberseite eingeschrieben ist. Es wird auch als Hämocytometer oder manchmal als Hämocytometer bezeichnet. Ziel ist es, dass die Suspension so verdünnt ist, dass sich bei Betrachtung in der Zählkammer keine Zellen überlappen und sich gleichmäßig über das Gitter verteilen. Pipettieren Sie die verdünnte Suspension mit den Zellen in die Vertiefung in der Zählkammer, wo sie sich durch Kapillarwirkung in der Gitterkammer absetzt. Stellen Sie die Zählkammer auf den Mikroskoptisch und betrachten Sie sie bei geringer Leistung.
Das Raster enthält Quadrate, die aus noch kleineren Quadraten bestehen. Wählen Sie ungefähr vier oder fünf Quadrate aus, oder wie viele Sie benötigen, um mindestens 100 Zellen zu zählen, in einem Muster Ihrer Wahl, wie zum Beispiel die vier Ecken und ein Mittelquadrat. Wenn die Zellen groß sind, können dies die großen Quadrate sein, aber wenn die Zellen klein sind, können Sie stattdessen die kleineren Quadrate wählen.
Das spezifische Volumen jedes Rasterquadrats kann je nach Hersteller der Zählkammer variieren, aber oft beträgt die Tiefe der Kammer 0,1 Zoll Millimeter, die Fläche der großen Quadrate beträgt 1 Quadratmillimeter und die Fläche der kleineren Quadrate beträgt 0,04 Quadrat Millimeter. Die größeren Quadrate haben dann ein Volumen von 0,1 Kubikmillimetern. Nehmen Sie für dieses Beispiel an, Sie haben insgesamt 103 Zellen in fünf Quadraten gezählt und die Ausgangsprobe verdünnt, bis der Verdünnungsfaktor 10. betrug-2.
Wenn jedes Gitterquadrat ein Volumen von 0,1 Kubikmillimeter hat und fünf gezählt wurden, dann betrug das Gesamtvolumen der gezählten Kammer 0,5 Kubikmillimeter und es gab 103 Zellen. Auf 1 Kubikmillimeter verdoppelt würde es 206 Zellen ergeben. Ein Kubikzentimeter entspricht 1 Milliliter, was für Flüssigkeiten ein sinnvolles Maß ist. Ein Kubikzentimeter hat 1000 Kubikmillimeter. Wenn also ein Kubikzentimeter oder ein Milliliter Suspension vorhanden gewesen wäre, hätten Sie 206.000 (206 x 1.000) Zellen gezählt. So sieht es als Gleichung aus:
Volumen des Rasterquadrats × Anzahl der gezählten Quadrate = Gesamtvolumen der gezählten Suspension
Anzahl der Zellen ÷ Volumen der gezählten Suspension = Zellzahl pro Kubikmillimeter
Zellzahl pro Millimeter gewürfelt × 1000 = Zellzahl pro Milliliter
Sie müssen jede Verdünnung berücksichtigen, die durchgeführt wurde, um die ursprüngliche Lösung unter dem Mikroskop zählbar zu machen. In diesem Beispiel beträgt der Verdünnungsfaktor 10-2. Um die Anfangskonzentration der Lösung zu berechnen:
Zellzahl pro Milliliter ÷ Verdünnungsfaktor = Zellkonzentration
In diesem Beispiel beträgt die Zellzahl pro Milliliter 206.000, geteilt durch 10-2 (0,01) ergibt eine Zellkonzentration von 20.600.000 Zellen pro Milliliter in der Ausgangsprobe.
