Flüssige Nährbrühe wird verwendet, um Bakterien wie Escherichia coli zu kultivieren. Die Rezepte für diese Brühe variieren je nach Bakterienart und dem Vorhandensein genetischer Veränderungen, z. B. Antibiotikaresistenz. Die Brühe kann durch Zugabe von Agar verfestigt werden, wodurch die Bakterien verschiedene Kolonien bilden können, während sie sich in Flüssigkulturen einfach im gesamten Volumen verteilen. Dies ist eine grundlegende, aber wesentliche Technik für fortgeschrittene Methoden wie das Klonen von Genen oder mikrobiologische Assays. In diesem Artikel wird davon ausgegangen, dass Standard-Labor-Escherichia coli-Stämme auf Luria-Brühe (LB)-Agarplatten (oder Petrischalen) kultiviert werden.
Wiegen Sie 10 Gramm Trypton in Bakterienqualität, 5 Gramm Hefeextrakt, 5 Gramm Natriumchlorid, 15 Gramm Agar oder Agarose und 1 Milliliter 1 N Natriumhydroxid ab. Mischen Sie diese mit einer Menge destilliertem und autoklaviertem sterilem Wasser, bis 1 Liter Medium erhalten ist. Autoklavieren Sie die Medien in locker verschlossenen Flaschen oder Kolben 25 Minuten lang. Auf etwa 50 Grad Celsius abkühlen lassen, bevor Reagenzien, die bei hoher Hitze zerstört werden, wie Antibiotika oder andere Nahrungsergänzungsmittel, zugegeben werden.
Lassen Sie das autoklavierte Medium auf 50 Grad Celsius und nicht unter 45 Grad Celsius abkühlen, da der Agar in seinem Behälter fest wird, bevor er gegossen werden kann. Besorgen Sie sich sterile Petrischalen und gießen Sie genug ein, um die gesamte Oberfläche der Platte und mindestens die Hälfte ihrer Tiefe zu bedecken. Vermeiden Sie ein Überfüllen der Platten und vermeiden Sie vorzugsweise, dass der Agar den oberen Rand der Schale berührt. Lassen Sie die Platten in einer sterilen Umgebung (z. B. unter einer Laminar-Flow-Haube) erstarren, indem Sie die Deckel offen und an einer Ecke der Haube lassen.
Trocknen Sie die Platten. Obwohl die Platten sofort nach dem Aushärten verwendet werden können, befindet sich auf der Oberfläche des Agars etwas Feuchtigkeit, die eine ausreichende Anhaftung von Bakterienkolonien verhindert. Daher ist es am besten, die Platten vor dem Aufbringen von Bakterien zu trocknen, z Raumtemperatur für einige Tage oder eine halbe Stunde unter einer Laminar-Flow-Haube oder bei 37 Grad Celsius Inkubator.
Bewahren Sie die Platten auf. Getrocknete Teller sollten verkehrt herum (umgedreht) auf ihren Deckeln gestapelt und in ihre Originale zurückgestellt werden verpackt, mit Klebeband verschlossen und entweder zum Schutz vor Licht in Folie eingewickelt oder in einem geeigneten Container. Schreiben Sie immer das Herstellungsdatum auf die Teller und vermeiden Sie die Verwendung, wenn die Teller älter als 2 Monate sind.
Verweise
- "Aktuelle Protokolle in der Molekularbiologie"; Karen Elbing und Roger Brent; 2002
Tipps
- Führen Sie möglichst viele der oben genannten Schritte (am besten alle) in einer sterilen Umgebung durch (z offene Flamme oder eine Laminar-Flow-Haube), um zu verhindern, dass luftgetragene bakterielle Verunreinigungen in den Medien.
Über den Autor
Palmer Owyoung hat einen Master of Arts in International Business von der University of California in San Diego und a Bachelor of Arts in Soziologie von der University of California in Santa Barbara und ausgebildeter Molekular Biologe. Seit 2006 ist er freiberuflicher Autor. Neben dem Schreiben ist er ein Vollzeit-Forex-Händler und Internet-Vermarkter.
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