Die Berechnung des Titers für ein Virus ist eine komplizierte Art zu sagen, dass ein Wissenschaftler die Anzahl der Viren in einer bestimmten Probe zählt. Um Virustiter zu berechnen, infizieren Wissenschaftler Platten mit wachsenden Bakterien mit Viruslösungen in unterschiedlichen Konzentrationen Ermitteln Sie die Anzahl der Viren in der ursprünglichen Lösung, indem Sie die Bakterien zählen, die aufgrund des Virus abgestorben sind Infektion.
Ziehen Sie Handschuhe an, füllen Sie 10 Kulturröhrchen mit 9 ml Brühe und beschriften Sie sie mit „10^-1“, „10^-2“, „10^-3“ und so weiter bis „10^-10“. Diese Röhrchen werden für virale Reihenverdünnungen verwendet, die zur Berechnung von Phagen verwendet werden Titer. Da Viren unglaublich hohe Konzentrationen erreichen können, müssen Sie sie verdünnen, um sie effektiv zählen zu können. Jedes Röhrchen repräsentiert eine zehnfache Verdünnung des Virus.
Nehmen Sie 1 ml der Mischkultur aus Ihrem Röhrchen mit der Aufschrift „10^-1“ und überführen Sie es mit einer neuen Pipette in das nächste Röhrchen mit der Aufschrift „10^-2“. Mischen Sie auch dieses Röhrchen.
Fahren Sie mit diesem Muster fort, um eine serielle Verdünnungsreihe zu erstellen. Am Ende erhalten Sie 9 Tuben mit 9 ml und 1 Tube mit 10 ml. Die Viruslasten in Ihren Röhrchen werden zwischen dem 10-fachen (Ihrem ersten Röhrchen) oder dem 100-fachen (Ihrem zweiten Röhrchen) bis zum zehn Milliardenfachen (Ihrem letzten Röhrchen) verdünnt.
Fügen Sie Ihrem Agar zwei Tropfen Bakterienkultur hinzu und mischen Sie ihn vorsichtig. Dies sind die Bakterien, die abgetötet werden, sodass Sie die Anzahl der Viruspartikel in einer bestimmten Lösung zählen können.
1 ml jeder seriellen Verdünnung in das entsprechende Agarröhrchen geben, während sich die Röhrchen noch im heißen Wasserbad befinden. Zum Beispiel sollte 1 ml Ihrer 10^-1-Serienverdünnung in das Agarröhrchen mit der Aufschrift „10^-1“ gehen.
Mischen Sie jedes Röhrchen und gießen Sie dann jedes Röhrchen in die Petrischale mit dem entsprechenden Etikett. Dadurch entsteht auf jeder Platte eine dünne Agarschicht, die mit Bakterien und Viren beimpft wurde. Lassen Sie die Platten über Nacht in einem Inkubator wachsen.
Nehmen Sie Ihre Platten aus dem Inkubator und untersuchen Sie sie. Sie sollten überall auf der Platte trübe Bereiche sehen, in denen Bakterien gewachsen sind, mit Ausnahme kleiner klarer Flecken, die als Plaques bezeichnet werden. Diese Plaques sind Flecken toter Bakterien, und jede Plaque repräsentiert ein Virus.
Nimm die Anzahl der Plaques auf deinem Teller und multipliziere sie mit 10. Wenn Sie 157 Plaketten zählen, erhalten Sie 1570.
Multiplizieren Sie die Zahl, die Sie im vorherigen Schritt erhalten haben, mit dem Kehrwert der Zahl auf Ihrem Verdünnungsröhrchen. Wenn die von Ihnen ausgewählte Platte beispielsweise die Platte 10^-5 war, würden Sie 1570 mit 10^5 multiplizieren, um 157000000 zu erhalten. Diese letzte Zahl ist Ihr Phagentiter und stellt die Anzahl der Viren pro ml Ihrer ursprünglichen Kultur dar.