Eine der klassischen Methoden zur Bestimmung der Mikrobenkonzentration in einer Probe besteht darin, die Probe zu verdünnen, die Mikroben auf Platten zu züchten und die Kolonien zu zählen. Die plattierten Mikroben wachsen aus einer koloniebildenden Einheit, die aus einer oder mehreren Zellen besteht, zu einer sichtbaren Kolonie, die gesehen und gezählt werden kann. Bakterien sind die am häufigsten vorkommenden Mikroben, die mithilfe von Plattenzahlen bestimmt werden. Koloniezählungen werden verwendet, um Mikroben in Boden, Wasser und Lebensmitteln zu erkennen und zu zählen. Protokolle zum Zählen von Kolonien betonen einen genauen und methodischen Ansatz.
Verdünnen von Proben, Plattieren und Inkubation
Wenn Sie einfach eine Mikrobenprobe auf eine Agarplatte streichen, sehen Sie so viele koloniebildende Einheiten, dass sich die einzelnen Kolonien vermischen und nicht mehr zu zählen sind. Um dieses Problem zu lösen, mischen Sie die Probe in ein flüssiges Medium, nehmen Sie eine kleine Menge dieser Mischung und verdünnen Sie sie weiter. Wiederholen Sie diesen Vorgang sechs bis zehn Mal. Verteilen Sie die letzte Verdünnung auf einer Agarplatte und inkubieren Sie diese vier bis sieben Tage lang, bevor Sie die Kolonien zählen.
Manuelles Zählen
Der Haupttrick beim Zählen von Kolonien besteht darin, jeden Koloniepunkt einmal zu zählen. Ein Ansatz besteht darin, die Petrischale auf einen Rasterhintergrund zu stellen und die Kolonien in jeder Rasterzelle zu zählen, indem man sich in einem methodischen Muster durch alle Zellen bewegt. Auch das Markieren gezählter Kolonien auf der Rückseite der Petrischale kann hilfreich sein. Im Allgemeinen müssen Sie mindestens drei Platten zählen; Verwenden Sie nur Platten mit 30 bis 300 Kolonien, um belastbare Schlussfolgerungen zu ziehen, schlägt das Microbiology Network vor, ein Unternehmen, das Labors und Herstellern Beratungsdienste anbietet. Platten mit Kolonien, die zum Zählen zu zahlreich sind, oder mit zu wenigen Kolonien müssen aus einer neuen Verdünnung erneut ausplattiert werden.
Automatisiertes Zählen
Menschliches Versagen erhöht den Zeitaufwand für das manuelle Zählen von Kolonien. Um sowohl die Genauigkeit als auch die Effizienz zu verbessern, legen Sie die Petrischale in ein automatisches Koloniezählgerät. Automatische Kolonienzähler nehmen ein Bild der Schale auf, trennen die Kolonien vom Hintergrund und verwenden dann einen Algorithmus, um die Kolonien auf der Platte zu zählen. Die Algorithmen können Schwierigkeiten haben, Kolonien zu unterscheiden, wenn sich zwei oder mehr Kolonien an den Rändern berühren, daher ist dies ein Bereich der laufenden Softwareentwicklung.
Das Zählen komplizierter machen
Die Genauigkeit der Berechnung der Mikrobendichte aus der Koloniezahl hat einige Einschränkungen. Koloniebildende Einheiten können eine einzelne Zelle, eine Zellkette oder ein ganzer Zellhaufen sein. Es wird davon ausgegangen, dass eine Kolonie eine Zelle darstellt, sodass die aus der Koloniezahl berechneten Konzentrationen niedrig sein können. Unterschiedliche Mikroben benötigen unterschiedliche Wachstumsbedingungen, und die Kolonien auf der Platte stellen nur die Mikroben dar, die unter diesen Inkubationsbedingungen auf diesem Wachstumsmedium gedeihen. Darüber hinaus werden bei der Koloniezählung keine toten Zellen registriert, was ein wichtiger Aspekt ist, wenn Sie die Konzentration der Zellen in der Originalprobe benötigen.
