Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine Labortechnik zur Trennung und Identifizierung von Verbindungen. Es ist eine Art der Säulenchromatographie, die auf verschiedene Polaritäten von Verbindungen in einer Lösung beruht, um sie zu trennen. HPLC unterscheidet sich von der Standardsäulenchromatographie dadurch, dass sie Druck verwendet, um die Lösung schneller durch die Säule zu drücken, und daher schnellere und manchmal genauere Ergebnisse liefert. Das Ziel besteht darin, Verbindungen in der Kolonne zu trennen und getrennt austreten zu lassen.
Aufgrund der Geschwindigkeit der HPLC und der Abhängigkeit von unterschiedlichen Polaritäten der Verbindungen sind zwei Verbindungen mit ähnliche Struktur und Polaritäten können gleichzeitig oder nahezu gleich aus dem Chromatographiegerät austreten Zeit. Dies wird als Koelution bezeichnet. Die Coelution macht es schwierig, genau zu bestimmen, welcher Teil der Mischung an welchem Punkt eluiert wurde.
HPLC verwendet typischerweise eine Glassäule, die mit Kügelchen aus verschiedenen Materialien gefüllt ist. Die durch die Säule gepressten Gemische enthalten Chemikalien, die unterschiedlich stark an die Kügelchen binden. Die Stärke der Bindung, die von der Ähnlichkeit der Polarität abhängt, bestimmt, wie lange die Chemikalie an das Kügelchen bindet, bevor sie freigesetzt wird. Einige Verbindungen binden so stark, dass sie im Wesentlichen nie von den Kügelchen in der Säule freigesetzt werden und nie in der die Säule verlassenden Lösung gemessen werden.
Typische Labortrenntechniken beinhalten die Entwicklung eines Assays oder eines Trennungsverfahrens und die anschließende Implementierung dieses Assays, um einzelne Verbindungen aus einer Lösung zu trennen. Dies führt jedoch in der Regel zu Mehrfachlösungen, die ebenfalls Verfahren durchlaufen müssen, was zu einem exponentiellen Anstieg der Komplexität führt. Obwohl HPLC diesen Prozess oft vereinfachen und beschleunigen kann, können die Kosten für die Entwicklung einer HPLC-Vorrichtung enorm werden. Die Entwicklung einer HPLC-Vorrichtung ist, obwohl sie viel effizienter ist, viel kostspieliger als die Entwicklung anderer Assays zur Trennung von Verbindungen. Dies macht es für viele kleine Privatlabore finanziell nicht tragfähig.
HPLC wird nicht nur verwendet, um einfache Verbindungen zu trennen, sondern auch, um bestimmte Proteine aus einem Zellgemisch zu isolieren. In diesem Fall sind die Kügelchen in der Säule normalerweise mit einem Antikörper beschichtet, der für das zu sammelnde Protein spezifisch ist. Die Proteine binden die Antikörper und die verbleibende Lösung wird durch die Säule geleitet, dann werden die Proteine mit einer anderen Lösung freigesetzt und gesammelt. Dies erfordert einen hochqualifizierten Techniker, der die Säule ständig überwacht und sicherstellt, dass der Prozess genau wie geplant abläuft.