HPLC bietet eine schnelle, automatisierte und hochgenaue Methode zur Identifizierung bestimmter chemischer Komponenten in einer Probe, die jedoch teuer und komplex sein kann und nicht für alle Proben funktioniert. Medizinische, forensische, Umwelt- und Fertigungslabore verwenden die Technik, um die Chemikalien in einer Probe zu quantifizieren und zu trennen. HPLC hat im Vergleich zu anderen Techniken sowohl Vor- als auch Nachteile.
HPLC und ähnliche Techniken
Wie andere Chromatographieformen ermöglicht die HPLC die Trennung chemischer Bestandteile durch den Einsatz einer mobilen Phase und einer stationären Phase. Die mobile Phase ist flüssig und die stationäre Phase ist fest. Da sich die verschiedenen Komponenten mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten bewegen, trennen sie sich voneinander. Alternative Techniken sind die Kapillarelektrophorese, bei der Substanzen durch Lösungen in einem elektrischen Feld und andere chromatographische Methoden wie Festphasenextraktion, Gaschromatographie und Dünnschicht Chromatographie.
Geschwindigkeit, Effizienz und Genauigkeit
Im Vergleich zu anderen chromatographischen Techniken wie TLC ist HPLC extrem schnell und effizient. Es verwendet eine Pumpe anstelle der Schwerkraft, um ein flüssiges Lösungsmittel durch ein festes Adsorptionsmaterial zu drücken, wobei sich verschiedene chemische Komponenten bei ihrer Bewegung mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten trennen. Der Vorgang kann in etwa 10 bis 30 Minuten abgeschlossen sein und liefert eine hohe Auflösung. Es ist genau und sehr gut reproduzierbar. Da es weitgehend automatisiert ist, können grundlegende HPLC-Läufe mit minimalem Training durchgeführt werden.
Kosten und Komplexität
Trotz ihrer Vorteile kann HPLC kostspielig sein und große Mengen teurer organischer Stoffe erfordern. Techniken wie Festphasenextraktion und Kapillarelektrophorese können kostengünstiger und noch schneller sein, insbesondere für Analysen nach guter Herstellungspraxis. Obwohl es relativ einfach ist, bestehende HPLC-Methoden zu verwenden, kann es komplex sein, Probleme zu beheben oder neue Methoden zu entwickeln. Dies liegt vor allem an der Vielzahl unterschiedlicher Module, Säulen und mobiler Phasen.
Empfindlichkeit und Auflösung
Generell ist die HPLC vielseitig und äußerst präzise, wenn es um die Identifizierung und Quantifizierung chemischer Komponenten geht. Die Präzision der HPLC mit vielen Schritten hängt weitgehend davon ab, dass der Prozess automatisiert und daher hoch reproduzierbar ist. HPLC weist für bestimmte Verbindungen eine geringe Empfindlichkeit auf, und einige können nicht nachgewiesen werden, da sie irreversibel adsorbiert werden. Flüchtige Stoffe lassen sich besser gaschromatographisch trennen.