Zeichnen Sie ein Diagramm der Produktkonzentration gegen die Zeit für die Daten aus dem ersten Reagenzglas des enzymatischen Assays. Hinweis: Die horizontale Achse sollte "Zeit" sein und die vertikale Achse sollte "Produktkonzentration" sein.
Berechnen Sie die lineare Regressionslinie für die Datenpunkte, die Sie in Abschnitt 1, Schritt 1 gezeichnet haben. Während Excel und Grafikrechner dieses lineare Modell leicht bestimmen können, können Sie eine Schätzung der Regression ableiten Steigung der Linie durch Dividieren der Differenz der Produktkonzentration zwischen benachbarten Datenpunkten durch ihre Zeitdifferenz.
Notieren Sie die Steigung der linearen Regressionslinie aus Abschnitt 1, Schritt 2 als "Anfangsreaktionsgeschwindigkeit (Vo)." Hinweis: Im Regressionslinienmodell "[Produktkonzentration] = m [Zeit] + b" ist der Koeffizient "m" der Steigung.
Wiederholen Sie die Schritte 1, 2 und 3 für den Rest der Teströhrchen im Assay.
Zeichnen Sie den Kehrwert der Substratkonzentration für jedes Reagenzglas gegen den Kehrwert seiner anfänglichen Reaktionsgeschwindigkeit (aus Abschnitt 1, Schritt 4). Wenn beispielsweise die Anfangsgeschwindigkeit für ein Reagenzglas mit einer anfänglichen Substratkonzentration von 50 Mikromolar (uM) 80 uM/s betrug, die Kehrwerte wären 1/50 uM für die Substratkonzentration und 1/80 uM/s für die anfängliche Geschwindigkeit. Hinweis: Die inverse Substratkonzentration sollte auf der horizontalen Achse liegen und die inverse Anfangsgeschwindigkeit sollte auf der vertikalen Achse liegen.
Hinweis: Die Substratkonzentration sollte auf der horizontalen Achse liegen und die anfängliche Reaktionsgeschwindigkeit sollte auf der vertikalen Achse liegen.
Bestimmen Sie die lineare Regressionslinie für das Diagramm, das Sie in Abschnitt 2, Schritt 1 gezeichnet haben. Hinweis: Da Sie den y-Schnittpunkt für die Regressionsgeraden kennen müssen, sollten Sie die Punkte von eingeben Abschnitt 2, Schritt 1 in Excel oder einen Grafikrechner und verwenden Sie die integrierte Regressionsmodellierung model Funktionalität.
Teilen Sie 1 durch den y-Schnittpunkt der linearen Regressionsgerade. Dadurch erhalten Sie den Wert des Kehrwerts von Vmax, der maximalen Reaktionsgeschwindigkeit für das Enzym. Hinweis: Wenn das lineare Regressionsmodell die Form "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + b" hat, dann wäre der Wert von "b" der y-Schnittpunkt. Teilen Sie 1 durch "b", um den Kehrwert von Vmax zu berechnen.
Teilen Sie 1 durch das Ergebnis aus Abschnitt 2, Schritt 3, um den tatsächlichen Wert von Vmax zu berechnen.
Bestimmen Sie die Konzentration des Enzyms im ursprünglichen Assay (siehe Rohdaten). Hinweis: Die Enzymkonzentration ist bei allen Reagenzgläsern gleich; nur die Substratkonzentrationen variieren im Assay.
Teilen Sie die Vmax (aus Abschnitt 2, Schritt 4) durch die Enzymkonzentration (aus Abschnitt 2, Schritt 5). Das Ergebnis ist der Wert von Kcat.
Andy Pasquesi, ein in Chicago ansässiger Texter, verfügt über umfangreiche Erfahrung als Autor für Automobile (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), Finanzdienstleistungen (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), Kunden aus dem Gesundheitswesen (Abbott) und Konsumgütern (Sony, Motorola, Knoll). Er hat einen Bachelor of Arts in Englisch von der Harvard University, kümmert sich aber nicht um das Oxford-Komma.