Forskere bruger flowcytometri til at skelne mellem forskellige typer celler eller mikroskopiske organismer. Det er et værktøj, der anvendes i mange applikationer såsom medicinsk diagnostik eller retsmedicinsk patologi. Mens denne eksperimentelle teknik er ret let at gennemføre, er analysen af de komplekse data, der produceres ved flowcytometeret er vanskeligere på grund af de mange eksperimentelle faktorer og / eller cytometeret parametre. Som sådan er det rutinemæssigt, at cytometriske data visualiseres og analyseres ved hjælp af sofistikerede professionelle programmer som CELLQuest eller FlowJo. Kendskab til flowcytometriteknikker, maskiner og software er nødvendig for at forstå de resultater, der produceres af disse eksperimenter.
Klargør formålet med eksperimentet ved at spørge: "Hvad blev spørgsmålet eller hypotesen undersøgt?" Det her vil blive krævet for at justere de rå resultater til det relevante format og indstillingerne til yderligere analyse ved hjælp af statistisk cytometri software. Foretag de ændringer, der er nødvendige for at få vist dataene med de relevante indstillinger (f.eks. Positive celler, negative porte, fluorescensintensitet, cellepopulationer osv.).
Find porte. Celler kan grupperes eller simpelthen observeres grupperet sammen på et tæthedsdiagram eller konturdiagram. Grupperne adskiller sig ofte afhængigt af deres identitet. Hvis en gruppe pletter meget intenst for en bestemt markør eller et antistof, konkluderes det, at medlemmerne af den gruppe alle har identiteten af den specifikke celletype, som udtrykker denne markør. Det er almindeligt at finde celler, der er positive for mere end en af disse markører, og disse celler er normalt et mellemprodukt og betegnet som "dobbeltpositivt."
Se på scattergrafer. Den måde, hvorpå grupperne af celler spredes i et spredningsdiagram, er en indikation af størrelsen på cellerne. Celler med meget store eller høje scattere er typisk store celler; de kan imidlertid være store, simpelthen fordi de indeholder en høj andel af cytoplasma, eller de kan være høje, fordi de har en meget stor kerne. Afhængigt af den biologi, der undersøges, vil dette naturligvis variere meget mellem eksperimenter.
Se på tal. Juster plotningerne for at vise forskellige parametre på en akse (normalt X-aksen), mens optællingerne holdes på Y-aksen. Dette angiver den andel af prøvepopulationen, der er positiv for den pågældende parameter, som a top vil normalt blive observeret i en positivt farvet prøve, som ikke vil være fra den negative kontrol prøve.
Se på histogrammer med flere parametre. Ved at justere X-aksen og Y-aksen til hver repræsenterer de en anden parameter, der var undersøgt under eksperimentet, er det muligt at få en dybere forståelse af egenskaberne af prøven. For eksempel ved at indstille X-aksen til rød fluorescens og Y-aksen til grøn fluorescens, kan kvadrater i porte beregnes for prøve for at vise fire regioner i en kvadrant, hvor celler er til stede og farves for enten rød eller grøn fluorescens, begge farver eller ingen ved alle. Dette gør det muligt at opdele en heterogen prøve i dens komponentdele og visualisere såvel som kvantificere eventuelle overlappende enheder.
Referencer
- “Analyse af flowcytometrodata”; Susan Sharrow; 1991
- "Flowcytometri: instrumentering og dataanalyse"; Marvin Van Dila; 1985
- "Flowcytometri-protokoller"; Teresa og Robert Hawley; 2004
Om forfatteren
Palmer Owyoung har en Master of Arts i international forretning fra University of California i San Diego og en Bachelor of Arts i sociologi fra University of California i Santa Barbara og er uddannet molekylær biolog. Han har været freelance skribent siden 2006. Ud over at skrive er han en fuldtids forexhandler og internetmarkedsfører.
Fotokreditter
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images