Beregning af titer for en virus er en kompliceret måde at sige, at en videnskabsmand tæller antallet af vira i en bestemt prøve. For at beregne virustitere inficerer forskere plader med voksende bakterier med virale opløsninger i forskellige koncentrationer og finde ud af antallet af vira i den originale opløsning ved at tælle de bakterier, der er døde på grund af virussen infektion.
Tag handsker på, fyld 10 dyrkningsrør med 9 ml bouillon og mærk dem "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" og så videre indtil “10 ^ -10.” Disse rør vil blive brugt til virale seriefortyndinger, der bruges til at beregne fag titer. Da vira kan vokse til utroligt høje koncentrationer, skal du fortynde dem for at tælle dem effektivt. Hvert rør repræsenterer en ti gange fortynding af virussen.
Tag 1 ml af den blandede kultur fra dit rør mærket "10 ^ -1" og overfør det med en ny pipette til det næste rør, mærket "10 ^ -2." Bland også dette rør.
Fortsæt dette mønster for at oprette en serie fortyndingsserie. Du ender med 9 rør på 9 ml og 1 rør på 10 ml. De virale belastninger i dine rør fortyndes alt fra 10 gange (dit første rør) eller 100 gange (dit andet rør) til ti milliarder gange (dit sidste rør).
Tilsæt to dråber bakteriekultur til din agar og bland den forsigtigt. Dette er de bakterier, der vil blive dræbt, så du kan tælle antallet af viruspartikler i en bestemt opløsning.
Tilsæt 1 ml af hver seriefortynding til det tilsvarende agar-rør, mens rørene stadig er i varmt vandbad. For eksempel skal 1 ml af din 10 ^ -1 seriefortynding gå i agarrøret mærket "10 ^ -1."
Bland hvert rør og hæld derefter hvert rør i Petri-pladen med den tilsvarende etiket. Dette vil skabe et tyndt lag agar, der er blevet podet med bakterier og vira i hver plade. Lad pladerne vokse natten over i en inkubator.
Tag dine plader ud af inkubatoren og undersøge dem. Du bør se overskyede områder i hele pladen, hvor bakterier er vokset, bortset fra små klare pletter kaldet plaques. Disse plaques er pletter af døde bakterier, og hver plaque repræsenterer en virus.
Tag antallet af plaketter ind på din tallerken og gang med 10. Hvis du tæller 157 plaketter, får du 1570.
Multiplicer det tal, du fik i det forrige trin, med det inverse af tallet på dit fortyndingsrør. For eksempel, hvis den valgte plade var 10 ^ -5-pladen, ville du gange 1570 med 10 ^ 5 for at få 157000000. Dette endelige tal er din fagtiter og repræsenterer antallet af vira pr. Ml af din oprindelige kultur.
