En af de klassiske måder at bestemme koncentrationen af mikrober i en prøve er at fortynde prøven, dyrke mikroberne på plader og tælle kolonierne. De belagte mikrober vokser fra en kolonidannende enhed bestående af en eller flere celler til en synlig koloni, der kan ses og tælles. Bakterier er den mest almindelige mikrobe til vurdering ved anvendelse af pladetællinger. Kolonitællinger bruges til at detektere og tælle mikrober i jord, vand og mad. Protokoller til optælling af kolonier understreger en nøjagtig og metodisk tilgang.
Fortyndende prøver, udpladning og inkubation
Hvis du blot udtværer en mikrobeprøve på en agarplade, vil du se så mange kolonidannende enheder, at de enkelte kolonier vil blande sig sammen, hvilket gør dem umulige at tælle. For at løse dette problem skal du blande prøven i et flydende medium, tage en lille mængde af blandingen og fortynde den yderligere. Gentag denne proces seks til ti gange. Spred den endelige fortynding på en agarplade, og inkuber den i fire til syv dage, før du tæller kolonierne.
Manuel optælling
Det primære trick ved optælling af kolonier er at tælle hver kolonipunkt en gang. En tilgang er at sætte petriskålen på en gitterbaggrund og tælle kolonierne i hver gittercelle, bevæge sig i et metodisk mønster gennem alle cellerne. Markering af tællede kolonier på bagsiden af petriskålen kan også være en nyttig tilgang. Generelt skal du tælle mindst tre plader; Brug kun plader, der indeholder 30 til 300 kolonier til at lave robuste slutninger, foreslår Microbiology Network, et firma, der leverer konsulenttjenester til laboratorier og producenter. Plader med kolonier, der er for mange til at tælle eller med for få kolonier, skal genplades fra en ny fortynding.
Automatiseret optælling
Menneskelig fejl tilføjer den tid, der er involveret i manuel optælling af kolonier. For at forbedre både nøjagtighed og effektivitet skal du placere petriskålen i en automatiseret kolonitæller. Automatiske kolonitællere tager et billede af skålen, adskiller kolonierne fra baggrunden og bruger derefter en algoritme til at tælle kolonierne på pladen. Algoritmerne kan have vanskeligheder med at differentiere kolonier, når to eller flere kolonier rører ved kanterne, så dette er et område med løbende softwareudvikling.
Gør tællingen mere kompliceret
Nøjagtigheden ved beregning af mikrobetæthed fra kolonitællinger har nogle begrænsninger. Kolonidannende enheder kan være en enkelt celle, en kæde af celler eller en hel klump af celler. Antagelsen er, at en koloni repræsenterer en celle, så koncentrationer beregnet ud fra kolonitællinger kan være lave. Forskellige mikrober har brug for forskellige vækstbetingelser, og kolonierne på pladen repræsenterer kun de mikrober, der trives på det vækstmedium under disse inkubationsbetingelser. Derudover registrerer kolonitælling ikke døde celler, hvilket er en vigtig overvejelse, når du har brug for koncentrationen af celler i den originale prøve.
