Bufferopløsninger modstår ændringer i pH, fordi de indeholder svage syrebasekonjugater, der neutraliserer H + og OH-ioner. Bufferopløsninger består af svage syrer eller baser og saltet af den syre eller base. Valg af et passende buffersystem afhænger af pH-området til buffering. De fleste biologiske reaktioner forekommer ved et pH-område på 6 til 8. Phosphatbuffere buffer over pH-området fra 6,5 til 7,5. Carboxylsyrebuffere er nyttige fra pH 3 til 6. Boratbuffere fungerer fra pH 8,5 til 10. Aminosyrebuffere, såsom glycin og histidin, udfører over en mangfoldighed af pH-områder. Tris-buffer er et af de mest anvendte buffersystemer i biologilaboratorier. Beregninger for en Tris-bufferopløsning vil blive brugt i det følgende eksempel, men metoden gælder for enhver bufferopløsning.
Brug produktet af den færdige opløsning molaritet og volumen til at bestemme de krævede mol baser. For eksempel, hvis der er behov for 2 liter af en 0,1 M opløsning af Tris-buffer, så er antallet af mol Tris, der kræves:
Beregn massen af buffer, der kræves ved at multiplicere antallet af mol, der er nødvendigt med basens molekylvægt. For eksempel er massen på 0,2 mol Tris-base lig med:
Opløs basen i destilleret vand ved hjælp af en magnetisk omrøringsstang og omrøringsplade. Opløs det i et volumen vand, der kun er lidt mindre end det endelige opløsningsvolumen (950 til 975 ml for hver liter slutopløsning). Tris-buffers pH ændres med koncentrationen og skal justeres igen, hvis der anvendes en for lille initialvolumen. Det er også bedst at forberede bufferen ved den samme temperatur, som den vil blive brugt under assayet eller eksperimentet, da Tris har store temperaturafhængige ændringer i pH.
Tips
- For at spare tid, når du forbereder en bufferopløsning, kan du bruge forberedte bufferkoncentrater ved den krævede pH-værdi og fortyndes til ønsket molaritet og volumen. Forbered bufferopløsning ved samme temperatur, som den vil blive brugt til at undgå betydelige pH-ændringer. Undgå tidskrævende pH-justeringer, titrer kun efter fortynding til den ønskede koncentration. Opløsning i for lille volumen fører til gentagne titreringer.
Advarsler
- Vær forsigtig, når du håndterer syrer og baser. Brug beskyttelsesbriller.
Om forfatteren
Carla Boulianne er en evolutionær biolog ved uddannelse og freelance forfatter af lidenskab. Ud over at skrive til Demand Studios og eHow er hun spilleforfatter til Forældre til et begavet barn på Suite101.com. Hun glæder sig over at udforske nye emner gennem omfattende forskning.
Fotokreditter
Foto med tilladelse til Emmi P. @ morgueFile.com